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期刊信息/Journal information
中国畜牧兽医
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
中国畜牧兽医

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

李琍

月刊

1671-7236

zgxmsy@caas.cn

010-62811226，62810371，62816020

100193

北京市海淀区圆明园西路2号

中国畜牧兽医/Journal China Animal Husbandry & Veterinary Medicine北大核心CSTPCDCSCD
查看更多>>《中国畜牧兽医》于1974年2月创刊，是国家新闻出版行政主管部门2014年第一批资质认定的学术期刊，前身为《国外畜牧科技》，2002年更名为《中国畜牧兽医》，是“中国精品科技期刊”、“中国科技核心期刊”、北大《中文核心期刊要目总览》、“中国农林核心期刊”和“RCCSE中国核心学术期刊(A)”收录期刊。本刊设有营养与饲料、生理生化、生物技术、遗传繁育、基础兽医、预防兽医、临床兽医、质量安全、环境安全等栏目。
正式出版
收录年代

    绵羊骨形态发生蛋白受体-1B基因研究进展

    杨初蕾李星瑶张译元唐红...
    649-658页
    查看更多>>摘要：绵羊繁殖性能在绵羊产业中有着重要意义，除通过一些技术手段(如同期发情、人工授精、超数排卵等)之外，在目前已知的关于能够提高绵羊繁殖力的16个基因共20个突变体当中，以骨形态发生蛋白受体-1B(bone morphogenetic protein receptor type-1B，BMPR-1B)基因对绵羊繁殖力的影响最大。BMPR-1B基因是世界上第一个被发现的多羔主效基因，其编码区的A746G突变导致蛋白质序列中第249位的谷氨酰胺被置换为精氨酸(Q249R)，最终能够引起绵羊排卵数和产羔数增加。作者介绍了绵羊多羔主效基因BMPR-1B及其突变体FecB(A746G)的发现与结构，简述了该基因分子方面的作用机理，对BMP/Smad信号通路的调控以及与绵羊繁殖之间的联系，并简单分析了 FecB突变后对绵羊卵巢、卵泡等组织细胞功能，激素调节和相关基因表达的影响。进一步加深对BMPR-1B基因的了解，为研究人员探明该基因诱使绵羊等动物提高产羔数的调控机制，相关配体、调控因子和上下游信号蛋白的影响以及加快哺乳动物高效育种繁殖、扩大种群规模和多胎品系的建立，增加养殖人员的经济收入等提供一些参考和帮助。

    骨形态发生蛋白受体-1B(BMPR-1B)FecB绵羊

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    基因修饰技术及其在动物育种和生物医药领域的应用

    闫艳霞李紫聪董亚铮李政...
    659-667页
    查看更多>>摘要：基因修饰技术是一种能精确改造生物基因组，实现外源基因定点整合和基因定点敲除的技术。早期的基因修饰形式主要是转基因，随着科学研究的不断深入，新型基因修饰方法也逐渐研发出来，包括敲除、敲入、定点突变等。根据研究或应用的目的，可以将基因修饰技术分为转基因和基因敲除两方面内容。近年来，随着现代分子技术的高速发展，基因修饰技术不断改进创新，其相关方法和技术已逐步应用于改良家畜性状、研究基因功能、制作动物生物反应器以及构建人类疾病动物模型等领域中，使得畜禽基因功能的研究和转基因育种更加高效，在动物遗传育种以及生物医药等领域取得了显著成就，弥补了传统转基因技术的随机整合、遗传不稳定等缺陷，具有广阔的发展前景。作者从动物转基因和基因敲除技术两方面阐述了基因修饰技术的发展现状及发展趋势，并简要概括了基因修饰技术在动物育种和生物医药领域的应用现状。

    基因修饰转基因技术基因敲除技术

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    密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析

    于吉锋谢晶黄勇肖璐...
    668-677页
    查看更多>>摘要：[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2，RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle，VLP)疫苗的制备策略，探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性，为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因，将双VP60基因插入真核载体pFastBacTM Dual，转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60，转染Sf9昆虫细胞，通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP6 0进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9:1比例制备VLP灭活疫苗，通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示，重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示，感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光，表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示，VP60蛋白折叠成VLP，大小为40 nm左右，呈现球形结构，表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性，最小免疫剂量为0。5 mL/只，免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒，并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白，该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。

    兔出血症病毒2型(RHDV2)病毒样颗粒(VLP)密码子偏好性重组杆状病毒免疫原性

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    A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立

    任建乐林铱婷姬康谭姗姗...
    678-688页
    查看更多>>摘要：[目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A，SVA)VP2蛋白多克隆抗体，建立检测SVA抗体的间接ELISA方法，以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中，构建重组表达质粒pET-28a-VP2，并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达，表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IF A)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板，通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品，分别用间接ELISA与IFA方法进行检测，分析间接ELISA方法的符合率。[结果]重组VP2蛋白以包涵体形式表达，大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合，与其他病毒无交叉反应，且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化，确定VP2包被浓度为4 μg/mL，阳性血清稀释浓度为1:250，封闭液为5％脱脂乳+5％BSA，血清样品和二抗孵育时间均为90 min，TMB底物反应时间为10 min，临界值为0。182。建立的间接ELISA方法与常见的猪病毒阳性血清不反应，与IFA符合率达94。0％。[结论]原核表达系统表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性，制备的多克隆抗体能与SVA和VP2发生特异性反应。建立的间接ELISA方法特异性高，与IFA符合率高，适用于临床SVA抗体检测和疫苗效力评价。

    A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白原核表达多克隆抗体间接ELISA

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    绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

    王永飞邓博文刘晓艳哈尔勒哈·阿曼太...
    689-699页
    查看更多>>摘要：[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae，Mo)EF-Tu基因，原核表达获得EF-Tu蛋白，制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体，为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG，并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析，利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达，经SDS-PAGE和Western blotting鉴定，利用镍柱亲和层析法纯化，以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了 EF-Tu基因中TGA位点，并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu'原核表达载体。生物信息学分析表明，克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高，亲缘关系最近;编码387个氨基酸，无N-糖基化位点和跨膜区域，存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点，二级结构由无规则卷曲(35。14％)、α-螺旋(26。87％)、延伸链(26。87％)及β-转角(11。11％)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示，目的蛋白大小约为43 ku，蛋白纯化浓度为0。615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示，制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000，能够特异性识别EF-Tu融合蛋白，具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了 EF-Tu基因的TGA密码子，原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白，制备其多克隆抗体效价为1∶128 000，为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

    绵羊肺炎支原体重叠延伸PCREF-Tu基因多克隆抗体

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    牛球虫体外培养研究进展

    胡峻豪刘继兵周佳丽马悦...
    700-708页
    查看更多>>摘要：牛球虫病(bovine coccidiosis)是由一种或多种艾美耳属球虫引起的具有高度致病性的寄生性原虫病，流行范围广泛，可导致患牛出现营养吸收不良、发育迟缓、水样或血样腹泻等症状，甚至引起死亡，严重危害养牛业的发展。目前主要通过药物预防对牛球虫病进行防控，但随着耐药虫株的出现以及人们对于兽药残留问题的关注，抗球虫新药的研发刻不容缓。体外培养作为实验动物研究的替代方案，可以人工模拟牛球虫自然宿主的体内环境和条件，且成本相对较低，对于研究球虫的入侵机制、球虫与宿主的相互作用以及抗球虫药物的药效评价具有重要意义。在已建立的体外培养体系中，牛球虫可以完成从子孢子到卵囊的部分或全部内生性发育过程，这为研究虫体的生命周期阶段和新的防治策略开辟了新的途径。笔者通过查阅国内外牛球虫体外培养的相关资料，对球虫子孢子的分离和纯化、原代细胞及细胞系培养、体外培养条件和影响因素以及体外培养的应用方面进行了详细阐述，以期为牛球虫的安全有效疫苗和防治药物的研发提供参考。

    牛球虫病艾美耳球虫体外培养药效评价

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    不同环境和营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌生长、产孢及几丁质酶表达的影响

    孙殿明张慧梅李柠杏孙焱森...
    709-718页
    查看更多>>摘要：[目的]研究温度、pH和不同营养条件对捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)生长及产孢特性的影响，分析其在碳氮饥饿条件下几丁质酶的表达水平，优化该菌的培养条件，为该菌的扩大培养提供参考依据。[方法]将圆锥节丛孢菌AC-shz1菌株接种于YPSSA培养基，分别置于不同温度(15、20、25、30和35 ℃)、pH(5。0、5。5、6。0、6。5、7。O、7。5和8。0)、碳源(果糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素、几丁质)、氮源(甘氨酸、苯丙氨酸、蛋白胨、酵母粉、硫酸铵、尿素)和碳氮比(1∶1、5∶1、10∶1、20∶1、40∶1)环境条件下进行培养，观察并记录菌丝的生长速度及形态，测定其产孢能力;在碳氮源饥饿条件下，采用实时荧光定量PCR方法对4种几丁质酶基因的表达水平进行分析。[结果]圆锥节丛孢菌在温度15～30 ℃均能生长，其中以25 ℃时菌丝生长最快且产孢能力最强;在pH为6。5～7。5时菌丝生长良好，其中以pH 7。0时产孢能力最强。圆锥节丛孢菌最适菌丝生长和产孢碳源为葡萄糖和蔗糖，其中含葡萄糖的培养基产孢量最高;最适氮源为酵母粉和蛋白胨，含酵母粉的培养基产孢量最高，以葡萄糖和酵母粉为碳氮源的最适碳氮比为5:1。与对照组相比，在碳饥饿条件下，捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-14(AC-14，P＜0。01)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-190(AC-190，P＞0。05)基因转录水平上调，捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-379(AC-379，P＞0。05)和捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌几丁质酶-483(AC-483，P＜0。01)基因转录水平下调;在氮饥饿条件下，上述4种几丁质酶基因转录水平均极显著下调(P＜0。01)。[结论]菌丝生长和产孢最适温度为25℃，最适pH为7。0，最适碳氮源分别为葡萄糖和酵母粉，最适碳氮比为5∶1。本研究结果为进一步研发具有高效的捕食线虫真菌生物防控制剂奠定了基础。

    捕食线虫真菌圆锥节丛孢菌温度pH碳氮源几丁质酶

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    副鸡禽杆菌lpxM蛋白的原核表达及免疫原性研究

    梁之瑄梅晨张雪徐浩钧...
    719-727页
    查看更多>>摘要：[目的]探究副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)外膜蛋白lpxM的免疫原性，为预防鸡传染性鼻炎提供理论参考。[方法]构建pET-28a-lpxM原核表达载体，经PCR扩增和双酶切鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，用IPTG进行诱导表达，并对诱导时间和诱导浓度进行优化，用尿素缓冲液纯化重组蛋白lpxM并进行SDS-PAGE分析。利用Western blotting鉴定重组蛋白的特异性。将重组蛋白与MONTANIDEISA 71 VG佐剂制备成疫苗v-lpxM，通过动物试验观察重组蛋白的免疫效果。[结果]重组质粒pET-28a-lpxM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导后成功表达，在37 ku处有目的蛋白特异性条带，在37 ℃、700 mmol/L IPTG、诱导4 h时蛋白表达量最高;重组蛋白lpxM在上清和沉淀中均有表达，且在沉淀中表达量相对较高;Western blotting结果显示，C型副鸡禽杆菌Modesto株的阳性鸡血清与纯化后的重组蛋白可发生免疫反应。免疫保护试验结果显示，v-lpxM疫苗对A、B和C型副鸡禽杆菌的保护率分别为0、20％和60％。[结论]本研究成功构建了原核表达载体pET-28a-lpxM，实现了 lpxM重组蛋白的高效表达，且表现出良好的免疫原性。研究结果为探究副鸡禽杆菌外膜蛋白lpxM的免疫学特性以及为鸡传染性鼻炎的预防和疫苗的研发奠定了基础。

    副鸡禽杆菌lpxM蛋白原核表达免疫原性

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    蛙壶菌潜在分布区及其风险因素预测与分析

    别佳沙龙倩阎建余
    728-735页
    查看更多>>摘要：[目的]壶菌病是一种由蛙壶菌(Batrachochytrium dendrobatidis)感染导致的疾病，在近半个多世纪的时间里，是导致两栖动物种群数量大量减少甚至灭绝的主要原因之一。目前，壶菌病尚没有行之有效的治疗方法，因此，对世界范围内蛙壶菌的分布与传播进行调查研究，分析蛙壶菌在世界和区域尺度的分布风险及影响因素，可为其预防措施的制定提供基础研究资料。[方法]使用蛙壶菌在世界范围内的分布数据，共考虑了 20个气候环境变量，经过对蛙壶菌分布数据和变量进行筛选，建立最大熵模型，比较纳入模型的6个变量与蛙壶菌分布风险的关系，并预测蛙壶菌在世界范围和中国大陆的分布风险。[结果]变量中对蛙壶菌分布概率贡献度最高的前4位依次为年平均气温、年降水量、温度季节性、降水季节性。蛙壶菌分布概率与年平均气温和温度季节性总体均呈先正相关后负相关，与年降水量和降水季节性分别呈正相关和负相关。蛙壶菌全球分布的高风险地区主要在中国大陆南部、澳大利亚东南部、巴布亚新几内亚中部、瑞典南部、德国、波兰、罗马尼亚、英国南部、爱尔兰、法国、马达加斯加东部、苏丹、美国南部、秘鲁东部、埃塞俄比亚和日本等。其在中国大陆分布的高风险区域主要集中在广东北部、广西中部和北部、云南、贵州、湖南、江西、福建、浙江、江苏南部、安徽南部、湖北南部、重庆、四川东部及南部、陕西南部等地区。[结论]蛙壶菌的分布与气温和降水关系密切，其在全球分布的高风险地区主要在欧洲、非洲南部和北美洲南部，在中国大陆分布的高风险区域主要集中在华中、华东、华南地区和西南地区的东南部。

    蛙壶菌最大熵模型风险预测两栖动物气象因素

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    戊型肝炎病毒研究进展

    刘丁语何振文刘宝玲王刚...
    736-747页
    查看更多>>摘要：戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒，目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体，HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染，其主要的传播途径为粪-口传播，也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中国家流行，而欧美等发达国家也有散发的病例。目前，检测HEV的常用方法是实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)，也有学者利用反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)和CRISPR系统等新型检测方法进行HEV检测。在药物治疗方面，可用利巴韦林、干扰素或多烯磷脂酰胆碱(PPC)等化合物治疗HEV引起的感染，也可使用中药单味或复方改善临床症状并作协同治疗。接种疫苗被认为是预防和控制HEV感染的有效手段，但目前仍无有效的HEV体外细胞培养系统，传统的灭活苗和减毒苗无法批量制备。当前HEV疫苗的研究方向主要有基因重组蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗和口服疫苗等。接种疫苗是预防戊型肝炎的重要措施，采用切断传播途径为主的综合性预防措施也可控制该病的流行。笔者主要通过对HEV的检测方法、药物治疗和疫苗免疫等方面的研究进展进行归纳和总结，并对HEV的防控研究进行展望，以期为HEV的预防与控制提供新的思路。

    戊型肝炎病毒(HEV)检测方法治疗疫苗

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