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期刊信息/Journal information
中国畜牧兽医
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
中国畜牧兽医

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

李琍

月刊

1671-7236

zgxmsy@caas.cn

010-62811226，62810371，62816020

100193

北京市海淀区圆明园西路2号

中国畜牧兽医/Journal China Animal Husbandry & Veterinary Medicine北大核心CSTPCDCSCD
查看更多>>《中国畜牧兽医》于1974年2月创刊，是国家新闻出版行政主管部门2014年第一批资质认定的学术期刊，前身为《国外畜牧科技》，2002年更名为《中国畜牧兽医》，是“中国精品科技期刊”、“中国科技核心期刊”、北大《中文核心期刊要目总览》、“中国农林核心期刊”和“RCCSE中国核心学术期刊(A)”收录期刊。本刊设有营养与饲料、生理生化、生物技术、遗传繁育、基础兽医、预防兽医、临床兽医、质量安全、环境安全等栏目。
正式出版
收录年代

    北京鸭DHAV-3抗性与易感品系的脂质轮廓鉴定与分析

    常卓梁素芸王帅钦杨宇泽...
    2253-2260页
    查看更多>>摘要：[目的]试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3，DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓，并筛选品系间差异脂质标志物。[方法]选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京鸭和易感北京鸭各6只，采集血液与肝脏组织，进行血液生化指标测定与基于液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的非靶向肝脏脂质组检测。采用t检验、偏最小二乘分析(PLS-DA)和差异倍数(FC)综合筛选品系间显著差异脂质。[结果]Z7-R系北京鸭血浆总胆固醇、低密度脂蛋白和磷脂含量均显著高于Z7-S系(P＜0。05)。脂质组分析共鉴定到1 532个脂质代谢物，涵盖了脂肪酰(FA)、甘油酯(GL)、甘油磷脂(GP)、鞘脂(SP)、固醇脂(ST)5个大类。共筛选到84个显著差异脂质，其中甘油酯类主要为甘油三酯(TG)，且Z7-R系含量均高于Z7-S系(P＜0。05);甘油磷脂类主要为溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)和游离脂肪酸(FFAs)，且Z7-R系含量均低于Z7-S系(P＜0。05)。共筛选到10个显著差异的脂质显著富集到鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、甘油酯代谢、亚油酸代谢和α-亚麻酸代谢通路中。[结论]脂质组学技术可用于区分北京鸭Z7-R系与Z7-S系，筛选到的10个显著差异脂质物质可作为潜在的DHAV-3抗性与易感性状相关生物标志物。

    北京鸭鸭甲肝病毒基因3型脂质组代谢

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    秦川牛MGP基因生物信息学分析及表达特性研究

    蒋蕾王玉鑫万媛昝林森...
    2261-2272页
    查看更多>>摘要：[目的]预测基质Gla蛋白(matrix Gla protein，MGP)的基本功能，揭示MGP基因在秦川牛中的组织表达规律以及在秦川牛前体脂肪细胞不同分化时期的表达特性，为进一步研究MGP基因对秦川牛脂肪发育调控的作用机制提供理论依据。[方法]运用生物信息学在线软件对多物种MGP蛋白进行相似性比对及系统进化树构建，并对牛MGP蛋白的理化性质、亚细胞定位等进行预测;使用油红O染色检验秦川牛前体脂肪细胞的分化效果;利用实时荧光定量PCR技术检测MGP基因在秦川牛不同组织中的表达情况，以及在前体脂肪细胞不同分化时期的表达特性。[结果]相似性比对结果显示，牛MGP蛋白与山羊的相似性最高(99％)，与斑马鱼的相似性最低(31％)。系统进化树显示，牛和山羊的亲缘关系最近，与斑马鱼的亲缘关系最远。MGP基因编码103个氨基酸;理论等电点为9。27，偏碱性;总平均疏水指数为-0。630，为亲水性蛋白;含有Sec/SP Ⅰ类型的信号肽，无跨膜结构，属于分泌蛋白;存在5个丝氨酸磷酸化位点和4个酪氨酸磷酸化位点，具有包含γ-羧基谷氨酸(Gla)的GLA_domain;二级结构中α-螺旋占比最高(55。34％)。油红O染色结果确定了分离培养的前体脂肪细胞分化效果良好。实时荧光定量PCR结果显示，MGP基因在秦川牛心脏中的表达量显著高于其他组织(P＜0。05)，在大肠和肾周脂肪中也有较高的表达水平，在小肠中的表达量显著低于其他组织(P＜0。05);MGP基因在前体脂肪细胞不同分化时期呈现先升高后降低的表达趋势，在前体脂肪细胞诱导分化第2天的表达量显著高于其他时间点(P＜0。05)，第10天的表达量显著低于其他时间点(P＜0。05)。[结论]试验预测了 MGP蛋白基本的结构和功能;MGP基因在秦川牛心脏组织中表达量最高，在小肠组织中表达量最低;MGP基因在前体脂肪细胞不同分化时期表现出先升高后降低的表达趋势。

    秦川牛MGP基因组织表达前体脂肪细胞

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    利用CRISPR/Cas9编辑系统构建ACTA1基因敲除的PEFs细胞系

    张雪萍刘嘉仪王彦芳吴添文...
    2273-2284页
    查看更多>>摘要：[目的]利用CRISPR/Cas9技术获得α-肌动蛋白1(actin alpha 1，ACTA1)基因敲除的猪胎儿成纤维细胞(porcine embryo fibroblasts，PEFs)，为后续在细胞水平上探究猪ACTA1基因功能及发掘友好基因座位奠定基础。[方法]通过实时荧光定量PCR检测ACTA1基因在巴马小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背部皮下脂肪和背最长肌7种组织中的表达情况;利用CRISPOR在线网站在猪ACTA1基因第7外显子区域设计3条向导RNA(single guide RNA，sgRNA)，并将其连接至pX330载体;通过T7E1酶切检测不同sgRNA活性，选择效率较高且符合目标的载体质粒共转染至PEFs中;利用有限稀释法筛选单克隆细胞，并对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定和脱靶分析。[结果]实时荧光定量PCR结果表明，ACTA1基因在背最长肌中的表达量极显著高于其他组织(P＜0。01)。设计的 3 条 sgRNA 的基因编辑效率分别为 24。87％(sgRNA1)、39。59％(sgRNA2)、36。93％(sgRNA3)，综合切割位置和基因编辑效率，选用sgRNA1和sgRNA2共转染细胞。基因型鉴定结果表明，获得的69株单克隆细胞中有20株单克隆细胞发生了编辑，其中单等位基因片段敲除细胞3株，双等位基因片段敲除细胞1株，片段敲除效率为5。8％(4/69)。脱靶分析结果显示，在预测的脱靶位点未检测到脱靶效应。[结论]本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑系统成功构建了 ACTA1基因纯合敲除的PEFs，研究结果为进一步探究ACTA1基因对猪骨骼肌发育调控提供了技术支撑和理论基础，同时为挖掘猪组织特异性表达的友好位点提供新思路。

    猪CRISPR/Cas9ACTA1基因猪胎儿成纤维细胞(PEFs)

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    青海湖裸鲤SMIT1和SMIT2基因克隆及其对碱度环境的应答

    卫唯高子韩岳苗左杨...
    2285-2299页
    查看更多>>摘要：[目的]哺乳动物钠/肌醇共转运蛋白(sodium/myo-inositol cotransporter，SMIT)有2个同源体，分别是SMIT1和SMIT2，属于溶质载体(SLC)超家族。试验旨在探究青海湖裸鲤SMIT1、SMIT2基因对碱度环境的应答，为后续SMIT1和SMIT2基因在碱度环境下参与肌醇转运的分子机制奠定基础。[方法]利用PCR技术扩增、克隆SMIT1、SMIT2基因CDS区，并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术检测SMIT1和SMIT2基因在淡水环境下青海湖裸鲤鳃、肾脏、脑等8个组织中的表达情况，以及不同碱度胁迫(0、J25、J50、J75、J100)下鳃和肾脏组织中2个基因表达的规律;利用气相色谱质谱法(GC-MS)检测不同碱度胁迫下鳃和肾脏组织中的肌醇含量变化。[结果]SMIT1基因CDS区为2 130 bp，共编码709个氨基酸，其氨基酸序列与犀角金线鲃相似性最高(86。5％)，与多鳞白甲鱼亲缘关系最近;SMIT2基因CDS区为2 016 bp，共编码671个氨基酸，其氨基酸序列与多鳞白甲鱼的相似性最高(90。3％)，与犀角金线鲃、多鳞白甲鱼的亲缘关系较近。SMIT1和SMIT2均属于溶质体超家族的SLC5家族成员，其中SMIT1蛋白包含2个SLC家族保守结构域。实时荧光定量PCR结果显示，淡水环境下SMIT1和SMIT2基因在青海湖裸鲤不同组织中均有表达，其中，SMIT1基因在脑和肾脏中表达量较高，SMIT2基因在肾脏中表达量最高，均显著高于其他组织(P＜0。05)。随着碱度的升高，与对照组相比，J25、J50、J100时SMIT1基因在青海湖裸鲤鳃中表达量均显著升高(P＜0。05)，在肾脏中整体表达量均显著升高(P＜0。05);J25时SMIT2基因在青海湖裸鲤鳃中表达量显著升高(P＜0。05)，J50、J75、J100时在肾脏中表达量均显著降低(P＜0。05)。GC-MS结果显示，随着碱度的升高，青海湖裸鲤鳃中肌醇含量均显著高于对照组(P＜0。05);肾脏中肌醇含量与对照组相比无显著变化(P＞0。05)。[结论]SMIT1、SMIT2基因CDS区分别长2 130和2 016 bp，分别编码709和671个氨基酸，SMIT1基因在青海湖裸鲤脑组织中高表达，而SMIT2基因在青海湖裸鲤肾脏中高表达。不同碱度胁迫下SMIT1、SMIT2基因在青海湖裸鲤鳃、肾脏中的表达规律不同;肌醇含量在鳃组织中显著升高，且在J50时达到最高，在肾脏中变化不显著。研究结果为进一步探究青海湖裸鲤适应碱度环境的分子机制提供参考依据。

    青海湖裸鲤钠/肌醇转运蛋白(SMIT)碱度胁迫肌醇

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    猪miR-192靶向调控Wnt7a基因表达的研究

    符彬彬王东升何凡李清春...
    2300-2307页
    查看更多>>摘要：[目的]鉴定猪miR-192与Wnt家族成员7A(Wnt7a)基因之间的靶向关系，为进一步构建miR-192介导的胚胎通讯提供依据。[方法]使用miRNA pull-down鉴定miR-192和Wnt7a基因间的互作关系;利用生物信息学软件RNAhybrid 2。2预测miR-192和Wnt7a基因3'-UTR的结合位点，构建含有miR-192结合位点的Wnt7a基因3'-UTR野生型和突变型基因片段，克隆至双荧光素酶报告基因质粒，通过NotⅠ、XhoⅠ酶切和测序进行鉴定;鉴定成功的质粒分别与miR-192 mimics和mimics NC共转染猪子宫内膜上皮细胞，检测双荧光素酶活性;将miR-192 mimics、mimics NC、miR-192 inhibitor、inhibitor NC分别与构建的Wnt7a基因3'-UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因质粒共转染至猪子宫内膜上皮细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测Wnt7a基因mRNA和蛋白的表达水平。[结果]pull-down结果显示，miR-192 mimics组与其阴性对照组相比，Wnt 7a基因相对表达量极显著升高(P＜0。01)，miR-192 input组相对于其阴性对照组极显著降低(P＜0。01);RNAhybrid 2。2软件预测到miR-192种子区与Wnt7a基因3'-UTR存在结合位点(UGACCUA);转染Wnt7a野生型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组相比双荧光素酶活性显著降低(P＜0。05)，转染Wnt7a突变型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组之间双荧光素酶活性无显著差异(P＞0。05)。实时荧光定量PCR结果表明，miR-192 mimics组Wnt7a基因mRNA相对表达量显著低于其阴性对照组(P＜0。05)，miR-192 inhibitor组显著高于其阴性对照组(P＜0。05)。Western blotting结果表明，过表达miR-192极显著抑制了 Wnt7a蛋白的表达(P＜0。01)，抑制miR-192后Wnt7a蛋白的表达量极显著上升(P＜0。01)。[结论]miR-192能够与Wnt7a基因3'-UTR发生靶向作用并抑制其表达。研究结果可为今后深入研究miR-192在妊娠着床过程中的调控机制提供理论依据。

    猪miR-192Wnt7a基因胚胎附植

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    不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因克隆、生物信息学及表达分析

    敬科民张鹏李雨谦田园...
    2308-2318页
    查看更多>>摘要：[目的]克隆牦牛丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1(serpin family E member 1，SERPINE1)基因序列，同时探究不同嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因核苷酸序列差异，为进一步研究其对牦牛肉嫩度的影响提供试验数据。[方法]根据GenBank中牦牛SERPINE1基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增克隆获得高、低嫩度牦牛背最长肌中的SERPINE1基因序列全长，并对其结构及编码蛋白进行生物信息学分析，通过实时荧光定量PCR检测不同嫩度牦牛背最长肌中SERPINE1基因表达量。[结果]高、低嫩度牦牛背最长肌组织中SERPINE1基因全长分别为8 315和8 318 bp，均编码402个氨基酸且氨基酸序列完全相同。高、低嫩度背最长肌组织中SERPINE1基因非编码序列中存在3个碱基缺失及22个碱基突变(4个碱基颠换、18个碱基转换)。牦牛SERPINE1基因核苷酸序列与普通牛、瘤牛、美洲野牛、绵羊、山羊、家猪、人、小鼠的相似性分别为99。26％、99。26％、99。59％、96。94％、97。02％、90。49％、86。52％和 80。10％。SERPINE1 蛋白是一个含有 23 个氨基酸信号肽的亲水性稳定膜外蛋白，位于细胞外，具有34个潜在磷酸化位点，包含1个反应中心环(reactive center loop，RCL)。SERPINE1蛋白二级结构主要由α-螺旋(44。78％)和无规则卷曲(35。32％)构成。实时荧光定量PCR结果显示，SERPINE1基因在高嫩度牦牛背最长肌中表达量极显著高于低嫩度牦牛背最长肌(P＜0。01)。[结论]本研究成功从高、低嫩度牦牛背最长肌组织中克隆SERPINE1基因全长并进行了生物信息学特征分析，为后续研究SERPINE1基因参与调控牦牛肉嫩度机制提供理论参考。

    牦牛SERPINE1基因嫩度生物信息学表达

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    质谱技术在兽用治疗性蛋白药物表征和定量分析上的应用

    邱基程杨宇欣张璐温泽宇...
    2319-2329页
    查看更多>>摘要：治疗性蛋白药物已成为药物开发的一个重要分支，由于其具有良好的临床获益和安全性，现已成为肿瘤、自身免疫等疾病治疗的重点研发药物。通过体外细胞表达的治疗性蛋白药物通常具有高度复杂性，因此，在开发或生产过程中建立一系列质量分析和评价标准来保证药物的一致性和安全性尤为重要。质谱技术已被广泛用于小分子药物开发，具有灵敏度高、选择性和特异性良好、高通量等优点，该技术已逐步成为治疗性蛋白药物质量分析研究的重要工具，用于治疗性蛋白药物结构表征、翻译后修饰分析、定量分析、杂质分析及相互作用等研究。笔者综述了常用于蛋白质分析的质谱组成，包括常见电离方式、解离方式和质量分析仪;在此基础上，对利用质谱技术进行治疗性蛋白药物定性、翻译后修饰(糖基化、二硫键)研究的一般样品处理方法和质谱方法进行分析，并对利用质谱技术进行蛋白质定量分析方法开发、样品前处理和常用分析程序进行分析阐述;同时，笔者也对抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate，ADC)表征、定量分析和其他质谱分析表征应用的一般方法进行总结。通过对上述内容研究分析，旨在为利用质谱技术加快兽用治疗性蛋白药物开发和研究提供参考和借鉴。

    治疗性蛋白药物质谱分析技术质量控制分析定量分析

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    山羊circFDXR的鉴定及其在卵巢颗粒细胞中高效表达的研究

    刘杰李之瀚郭聪慧冯光杭...
    2330-2341页
    查看更多>>摘要：[目的]鉴定山羊环状RNA(circular RNA，circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达，建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。[方法]利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质分离、荧光原位杂交(FISH)检测circFDXR亚细胞定位。利用同源重组将circFDXR的线性序列无缝克隆至慢病毒载体pLC5-ciR，转染至293T细胞包装病毒后进行病毒滴度测定，并确定最佳感染复数(MOI)，并以最佳MOI感染山羊原代卵巢颗粒细胞，通过实时荧光定量PCR检测过表达效率，并测序验证circFDXR是否正确环化。[结果]山羊circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中，耐受RNase R酶的消化。成功构建circFDXR慢病毒过表达载体，浓缩病毒滴度为5。49×109 TU/mL，感染山羊卵巢颗粒细胞的最佳MOI为100。实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，过表达组circFDXR表达量极显著升高(P＜0。01)，测序结果显示过表达的circFDXR可以正确环化。[结论]circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中，相比线性RNA具有更高的稳定性。利用慢病毒包装的circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中可以正确环化，本试验结果为进一步研究circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中的功能奠定了理论基础。

    山羊circFDXR慢病毒包装卵巢颗粒细胞

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    简州大耳羊CKMT2基因克隆、生物信息学分析及时空表达研究

    孙诗雨李金岚邢佳妮董耀徽...
    2342-2353页
    查看更多>>摘要：[目的]克隆简州大耳羊肌节线粒体肌酸激酶2(creatine kinase mitochondrial 2，CKMT2)基因并探究其生物学特征，明确其在简州大耳羊不同组织以及不同分化阶段成肌细胞中的表达特性。[方法]采集简州大耳羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、背最长肌、臂三头肌组织样品，利用PCR方法扩增简州大耳羊CKMT2基因并克隆测序，通过在线软件对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测CKMT2基因在简州大耳羊不同组织及不同分化阶段成肌细胞中的表达水平。[结果]简州大耳羊CKMT2基因全长1 314 bp，其中包括CDS区1 259 bp，编码419个氨基酸，与绵羊和羚羊的亲缘关系最近。CKMT2蛋白是一种无信号肽及跨膜结构域的碱性亲水稳定蛋白，主要定位于线粒体、过氧化物类酶体及细胞质，共包含32个磷酸化位点、1个N-糖基化位点以及4个O-糖基化位点。蛋白二级结构主要包括a-螺旋(39。14％)、无规则卷曲(36。28％)、延伸链(16。23％)和β-转角(8。35％)，三级结构与二级结构预测结果基本一致。蛋白互作分析结果显示，CKMT2蛋白与半胱氨酸和甘氨酸富含蛋白3(cysteine and glycine-rich protein 3，CSRP3)、M 型肌酸激酶(creatine kinase M-type，CKM)、磷酸甘油酸变位酶 2(phosphoglycerate mutase 2，PGAM2)等蛋白存在相互作用。组织表达谱结果显示，CKMT2基因在简州大耳羊心脏中表达量最高，显著高于其他组织(P＜0。05);在背最长肌中表达量较高，显著高于脾脏和臂三头肌(P＜0。05)o时序表达谱结果显示，简州大耳羊CKMT2基因在成肌细胞诱导分化4 d时表达水平达到峰值，显著高于0、6 d(P＜0。05)o[结论]本研究成功克隆简州大耳羊CKMT2基因序列并明确了其分子特征，其在心脏、背最长肌以及成肌分化4 d时表达量较高。研究结果为进一步揭示CKMT2基因调控简州大耳羊成肌细胞增殖分化的分子机制奠定基础。

    简州大耳羊CKMT2基因克隆组织表达细胞分化

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    1株抗真菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)lut-Y1的鉴定及抑菌活性研究

    袁惠君余诗曼徐琰莹袁毅君...
    2354-2364页
    查看更多>>摘要：[目的]探究1株来自枸杞果实的贝莱斯芽孢杆菌lut-Y1的生长特性及抑菌活性，为微生态制剂的开发和应用提供参考。[方法]通过形态观察和16S rDNA基因测序分析对该菌株进行鉴定;测定该菌株生长曲线及最适pH、碳源、氮源及盐耐受度;采用平板对峙法观察该菌株对链格孢菌(Alternaria alternate)、小麦根腐离蠕孢(Bipolaris sorokiniana)和小孢壳二孢(Ascochyta leptospora)的颉颃作用，并分析该菌株发酵液对3种病原真菌的抑菌活性。[结果]lut-Y1菌株在LB、NA和PDA培养基上均生长良好。根据形态和16S rDNA基因序列特征将lut-Y1菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。在LB液体培养基中，lut-Y1菌株在0～3 h为迟滞期，3～18 h为对数期，18～62 h为稳定期，62 h后进入衰亡期;最适pH为7。0，最适碳源和氮源分别为蔗糖和蛋白胨，对NaCl的耐受量不超过2。0 g/L。lut-Y1菌株对链格孢菌有明显的颉颃作用，对小麦根腐离蠕孢和小孢壳二孢的颉颃作用较弱。对峙平板的两菌交界处，链格孢菌基内菌丝细弱、弯曲;小麦根腐离蠕孢基内菌丝细胞壁被破坏，有泡状突起。发酵液添加量为25％时生长圈直径分别缩小72。80％和83。24％。[结论]贝莱斯芽孢杆菌lut-Y1具有较好的抑菌活性，可为开发以芽孢杆菌为主要活性成分的微生态制剂提供材料。

    贝莱斯芽孢杆菌鉴定生物学特性颉颃作用抑菌效果

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