查看更多>>摘要:[目的]阐明健脾祛湿方(Jianpi Qushi decoction,JQD)治疗大鼠非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的药效和分子机制.[方法]试验通过饲喂高脂饲料建立大鼠NAFLD模型,将大鼠随机分为模型、奥利司他(32.4 mg/kg)和JQD低(0.35 g/kg)、高(0.70 g/kg)剂量组,另设对照组,每组6只.奥利司他和JQD不同剂量组大鼠灌胃给药,1 mL/只,每天1次,连续7周,对照组与模型组大鼠灌胃等剂量的生理盐水.试验结束后采集大鼠血液、肝脏组织.通过ELISA法测定大鼠血清血脂水平,主要包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C);统计大鼠肝脏指数,检测肝脏抗氧化指标(谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA));采用HE染色和油红O观察大鼠肝脏组织形态结构.利用药物和疾病靶点相关数据库分析JQD治疗NAFLD的活性成分和关键靶点;通过Cytoscape 3.7.2软件构建"药物-成分-靶点"网络图;通过分子对接和实时荧光定量PCR验证JQD主要活性成分和关键靶点的作用效果.[结果]与对照组相比,模型组大鼠血清中TC、TG、LDL-C和肝脏中MDA含量及肝脏指数均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),血清中HDL-C含量和肝脏中GSH含量及SOD、CAT活性均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01).与模型组比,JQD低、高剂量组大鼠血清中TC、TG含量和肝脏中MDA含量及肝脏指数均显著降低(P<0.05),肝脏中SOD、CAT活性和GSH含量均显著升高(P<0.05).HE染色和油红O染色结果显示,对照组大鼠肝细胞形态正常,肝索整齐;模型组大鼠肝脏发生明显的脂肪变形,肝细胞萎缩,布满大小不一的空泡,肝索形态紊乱;JQD低、高剂量组大鼠肝脏空泡数量明显减少,肝索清晰可见.网络药理学共筛选出JQD的有效活性成分35个和NAFLD疾病靶点1 890个;网络拓扑分析结果显示,JQD治疗NAFLD的核心活性成分为山柰酚、异鼠李素和槲皮素等,其核心治疗靶点为肿瘤坏死因子(TNF)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)和血管内皮生长因子A(VEGFA)等.分子对接结果显示,核心活性成分和关键靶点的结合能均<-5.0 kJ/mol,相互之间具有较好结合活性.实时荧光定量PCR结果显示,与模型组相比,JQD低、高剂量组大鼠肝脏中TNF和PPARG基因表达量均极显著降低(P<0.01),JQD高剂量组VEGFA基因表达量极显著降低(P<0.01).[结论]JQD对NAFLD显示出良好的治疗效果,其作用机制可能与降低血脂水平、提高肝脏抗氧化酶活性有关.