查看更多>>摘要:目的 探讨下丘脑外侧区(lateral hypothalamus,LHA)至伏隔核(nucleus accumbens,NAc)间黑色素浓缩激素(melanin-concentrating hormone,MCH)神经通路对小鼠焦虑样行为的调控作用.方法 37只6~8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠(18-22 g)进行以下实验:(1)5只小鼠,NAc内注射荧光金(flouro-gold,FG),1周后采用逆行追踪结合免疫荧光染色法,观察LHA中FG和MCH免疫阳性神经元共存情况.(2)32只小鼠LHA注射可激活MCH神经元的腺相关病毒,2周后按体质量匹配原则分为4组:NS+NS组[腹腔注射生理盐水(normal saline,NS),NAc注射NS(1.5 μL)]、NS+SNAP94847 组(腹腔注射 NS,NAc 注射 SNAP(2 mg/mL,1.5 μL),SNAP94847 为 MCH 1型受体拮抗剂]、CNO+NS组[腹腔注射氯氮平N-氧化物(CNO,0.15 mg/kg),NAc注射NS(1.5 μL)]和CNO+SNAP组[腹腔注射CNO,NAc注射SNAP].采用旷场实验(open field test,OFT)、高架十字迷宫(ele-vated plus maze,EPM)实验和埋珠实验(marble burial test,MBT)观察化学遗传学方法激活MCH神经元对小鼠焦虑行为的影响.采用Graphpad Prism 8.0版软件进行统计分析,多组间比较采用2x2析因设计方差分析.结果 (1)FG逆行追踪结合荧光免疫组化方法结果显示,LHA内MCH神经元发出神经纤维投射至NAc神经元.(2)化学遗传法激活MCH神经元后,各组小鼠OFT实验中,CNO干预和SNAP干预对中心区域停留时间(F交互=2.899,P>0.05)和移动距离(F交互=1.603,P>0.05)的交互作用均无显著性.中心区域停留时间(FCNO=6.767,FSNAP=7.656,均P<0.05)和移动距离(FCNO=12.480,FSNAP=7.999,均P<0.01)的CNO干预主效应和SNAP干预主效应均显著.CNO+NS组小鼠中心区域停留时间[(89.00±19.16)s),(63.75±13.58)s,P<0.05]和移动距离[(593.79±108.18)cm,(426.81±66.14)cm,P<0.05]显著短于 NS+NS 组(均 P<0.05);CNO+SNAP 组中心区域停留时间[(87.38±16.57)s]和移动距离[(569.27±73.20)cm]显著长于 CNO+NS 组(均 P<0.05).EPM实验中,CNO干预和SNAP干预对小鼠进入开放臂次数(F交互=2.79)和停留时间(F交互=2.871)的交互作用均无显著性(P>0.05).小鼠进入开放臂次数(FCNO=10.43,P<0.01;FSNAP=4.96,P<0.05)和停留时间(FCNO=5.232,FsNAP=7.597,均P<0.05)的CNO干预主效应和SNAP干预主效应均显著.CNO+NS组小鼠进入开放臂次数[(13.13±3.36)次,(7.63±3.70)次,P<0.01]和停留时间[(37.68±11.37)s,(22.98±7.00)s,P<0.05]均少于 NS+NS 组;CNO+SNAP 组进入开放臂次数[(12.00±3.02)次]和停留时间[(39.41±10.58)s]均显著多于CNO+NS组(均P<0.05).各组埋珠实验CNO和SNAP交互作用无显著性(F交互=2.746,P>0.05),CNO干预主效应和SNAP干预主效应均显著(FCNO=8.125,P<0.01;FSNAP=5.383,P<0.05).CNO+NS 组小鼠埋珠数量多于 NS+NS 组[(16.13±2.10)个,(11.88±3.23)个,P<0.05];CNO+SNAP 组埋珠数量少于 CNO+NS 组[(12.38±2.33)个,(16.13±2.10)个,P<0.05].结论 LHA到NAc间MCH神经通路活性增强可促进小鼠的焦虑样行为,为焦虑发生机制研究提供新的思路.