查看更多>>摘要：目的 探讨天麻素(GSTD)对高脂和高胆固醇(HFHC)饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗作用及可能机制.方法 6周龄雄性C57BL/6小鼠按体重分为6组,每组8只:正常对照组、模型组、模型+GSTD 12.5,25.0和50.0 mg·kg-1组及模型+二甲双胍(Met)100 mg·kg-1阳性对照组.除正常对照组外,其余各组小鼠饲喂HFHC饮食24周建立NASH模型;第17周开始,治疗组同时ig给予相应分组药物,每天1次,连续8周.第24周末,测量小鼠肝湿重、体重和肝指数.HE染色观察肝组织形态,计算非酒精性脂肪性肝病活动积分(NAS),Masson染色观察肝组织胶原纤维增生,油红O染色观察肝组织脂质沉积,血糖仪测全血血糖,ELISA法检测血清胰岛素水平计算胰岛素抵抗指数;化学显色法检测血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,肝组织中甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、游离脂肪酸(NEFA)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;实时定量PCR(RT-qPCR)检测肝组织脂质合成基因〔脂肪酸合成酶(FASN)、血小板反应蛋白受体(CD36)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)〕脂质氧化基因PPARα、肉毒碱棕榈酰基转移酶1α(CPT1-α)、炎症因子基因〔肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、趋化因子配体2(CCL2)和CCL5〕和纤维化标志物基因〔Ⅰ型胶原α1(ColⅠα1)、肌动蛋白α2(Actα2)、结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)〕mRNA水平;Western印迹法检测肝组织胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)和NF-κB蛋白磷酸化水平.结果 与正常对照组相比,模型组肝湿重和体重增加(P<0.01),肝指数升高(P<0.05);肝组织出现严重的大泡性脂肪变性,并伴有大量炎症细胞浸润和胶原纤维增生,NAS评分升高(P<0.01);血糖和血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数以及血清GPT和GOT活性升高(P<0.01);肝组织TG、TC、NEFA和MDA水平升高(P<0.01),GSH水平、SOD和CAT活性降低(P<0.01);脂质合成基因mRNA水平升高(P<0.01),脂质氧化基因mRNA水平降低(P<0.01);炎症因子和纤维化基因mRNA水平升高(P<0.01);肝组织IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平降低(P<0.01),NF-κB蛋白磷酸化水平升高(P<0.01).与模型组相比,模型+GSTD 50.0 mg·kg-1组肝湿重、体重和肝指数降低(P<0.05,P<0.01).模型+GSTD 25.0和50.0 mg·kg-1及模型+Met 100 mg·kg-1组肝组织大泡性脂肪变性减少,NAS评分显著降低(P<0.05,P<0.01),炎症细胞浸润和胶原纤维增生减少,同时,血糖和血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数以及血清GPT和GOT活性降低(P<0.05,P<0.01);此外,模型+GSTD 50.0 mg·kg-1组肝组织中TG、TC、NEFA和MDA水平降低(P<0.01),GSH水平、SOD和CAT活性升高(P<0.01),脂质合成基因mRNA水平降低(P<0.01),脂质氧化基因mRNA水平增加(P<0.01);模型+GSTD 25.0和50.0 mg·kg-1组肝组织中炎症因子和纤维化基因mRNA水平均显著下降(P<0.05,P<0.01);模型+GSTD 25.0和50.0 mg·kg-1及模型+Met 100 mg·kg-1组肝组织IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平升高(P<0.01),NF-κB蛋白磷酸化水平降低(P<0.01).结论 GSTD对HFHC饮食诱导的小鼠NASH具有显著的治疗作用,其作用机制可能与激活肝内IRS-1/Akt信号通路,缓解氧化应激和抑制NF-κB信号介导的炎症反应有关.
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