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期刊信息/Journal information
中国中药杂志
中国中药杂志

肖培根

半月刊

1001-5302

cjcmm2006@188.com,cjcmm2006@126.com

010-64045830

100700

北京市东直门内南小街16号

中国中药杂志/Journal China Journal of Chinese Materia MedicaCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本刊为中国现存创刊最早、发行量最大的中药学学术性刊物，论文被CA（化学文摘），BA（生物学文摘），IPA（国际药学文摘）、美国国立医学图书馆MEDLINE数据库等国际著名文摘和数据库收录；为“中国科学引文数据库”及“中国学术期刊综合评价数据来源期刊”；为《中国期刊网》及《中国学术期刊（光盘版）》收录。
正式出版
收录年代

    薰鲁香中1个新的降三萜类化合物

    安学瑞冯亚萍孙禹薇杨鑫...
    6342-6351页
    查看更多>>摘要：综合运用多种现代色谱分离方法从薰鲁香中分离得到10个化合物,通过HR-ESI-MS、IR、UV、NMR、量子化学计算核磁共振参数(qcc-NMR)等技术和文献对比,分别鉴定为17β-hydroxy-28-norolean-18-en-3-one(1)、28-norolean-12,17-dien-3,11-dione(2)、28-norolean-16,18-dien-3-one(3)、(24Z)-26-hydroxy-7,24-dientirucalla-3-one(4)、masticadienonic acid(5)、mastica-dienolic acid(6)、erythrodiol(7)、3β,28-dihydroxyoleana-11,13(18)-diene(8)、3-oxo-olean-9(11),12-dien-28-oic acid(9)、12-oleane-3,11-dione(10).其中,化合物1为新化合物,化合物2为新天然产物,化合物1～2、4、7～9均为首次从薰鲁香中分离得到.化合物1可显著抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7中NO的产生,IC50为(7.44±0.49)μmol·L-1,强于阳性对照地塞米松[dexamethasone,IC50为(9.93±1.17)μmol·L-1],化合物2～3、5、9～10显示出一定的抑制效果,IC50在14.82～28.82μmol·L-1;化合物4～5、7可显著抑制人结肠腺癌细胞SW480的生长,IC50分别为(16.13±1.69)、(27.40±1.81)、(10.01±0.10)μmol·L-1.

    薰鲁香化学成分降三萜抗炎抗结直肠癌

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    基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和UPLC的香青兰化学成分定性与定量分析

    胥明磊高慧敏张永欣李治建...
    6352-6367页
    查看更多>>摘要：采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)快速鉴别香青兰的化学成分,并对其主要成分进行UPLC含量测定.质谱分析采用电喷雾离子源(ESI),负离子模式下采集数据,结合对照品的保留时间和质谱信息、自建化合物数据库、PubChem数据库等,从香青兰中鉴定化合物68个,其中黄酮类36个、苯丙素类22个,苯酚类4个、其他类化合物6个.在此基础上,建立同步测定木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素-7-O-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素-7-O-葡萄糖醛酸苷、金合欢素-7-O-(6″-O-丙二酸单酰)-葡萄糖苷和金合欢素等8种主要成分的UPLC定量方法.采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-含0.1％甲酸和0.1％磷酸的水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长330 nm,流速0.4 mL·min-1,柱温35℃.上述8种成分在较宽的质量浓度范围(50或100倍)内,呈现良好的线性关系(r≥0.9999),平均回收率为97.5％～105.1％,RSD为0.90％～3.4％(n=6),该法简便、准确、可靠.17批香青兰样品中,上述8种成分的质量分数分别为0.405～2.10、0.063～0.342、0.446～2.43、0.415～1.47、1.57～4.34、0.173～0.386、1.00～5.40、0.069～0.207 mg·g-1,说明其内在质量存在较大差异,需进行良好的质量控制以保障其药效.该研究为香青兰的药效物质快速发现、整体质量控制与评价以及质量标准的制修订提供科学依据.

    香青兰超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术定性分析含量测定质量控制

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    小檗碱介导钟控基因调节糖脂代谢改善肝细胞胰岛素抵抗的分子机制

    延李科崔灿王颖朱水兰...
    6368-6377页
    查看更多>>摘要：探讨小檗碱介导脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1基因(brain and muscle arnt-like 1,BMAL1)为中心的钟控基因调节代谢网络改善肝细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的分子机制.优化建立地塞米松诱导肝IR-HepG2模型,5、10、20μmol·L-1小檗碱干预24 h.葡萄糖氧化酶法和细胞活力(cell counting kit-8,CCK-8)法分别检测细胞葡萄糖消耗量和细胞活力;过碘酸-雪夫(periodic acid-Schiff stain,PAS)染色法和脂质荧光法分别检测糖原和脂质;免疫荧光检测BMAL1和昼夜自发输出周期蛋白kaput(circadian locomotor output cycles kaput,CLOCK);蛋白免疫印迹法检测BMAL1、CLOCK、昼夜节律调节因子2(period circadian clock 2,PER2)、隐花色素昼夜节律调节因子1(cryptochrome circadian regulator 1,CRY1)、Rev-Erbα、碳水化合物应答元件结合蛋白(carbohydrate response element-binding protein,ChREBP)、过氧化物酶体增殖物激活受体 α/γ(peroxi-some proliferators-activated receptorsα/γ,PPARα/γ)、固醇调节元件结合蛋白1C(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1C)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1)、脂肪酸合成酶(fat-ty acid synthase,FASN)、肉碱棕榈酰转移酶1α(carnitine palmitoyltransferase 1α,CPT1α)、烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、脂联素(adiponectin,ADPN)、胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate 2,IRS2)、磷脂酰肌醇3-激酶p85调控亚基(phosphatidylinositol 3-kinase regulatory sub-unit p85,PI3Kp85).此外,检测cAMP依赖蛋白激酶α(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPKα)、Akt、mTOR、GSK3β 和BMAL1磷酸化水平.添加20μmol·L-1 CLK8抑制剂检测葡萄糖消耗量及mTOR、ChREBP和PPARα 蛋白.结果显示,小檗碱可增加IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量和糖原含量且降低胞内脂质;增加IR-HepG2细胞时钟蛋白BMAL1和CLOCK表达及核定位,上调BMAL1.小檗碱可上调ADPN、IRS2、PI3Kp85、p-Akt(Ser473)/Akt、p-mTOR(Ser2448)/mTOR、PPARα和CPT1α水平,下调p-GSK3β(Ser9)/GSK3β、ChREBP、SREBP-1C、ACC1和FASN水平;CLK8反证研究提示抑制BMAL1:CLOCK相互作用可减弱小檗碱降糖效应,上调ChREBP且下调mTOR和PPARα水平.因而推测小檗碱介导BMAL1为中心的时钟调控代谢网络改善肝细胞IR.

    2型糖尿病胰岛素抵抗脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1基因(BMAL1)时钟调控基因小檗碱糖脂代谢

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    基于FAK/Src/ERK通路探讨西黄丸对前列腺癌血管生成、侵袭和转移的影响

    龙衍罗新筠邹博戴新军...
    6378-6388页
    查看更多>>摘要：基于局部黏着斑激酶(FAK)/类固醇受体共激活因子(Src)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路,探讨西黄丸对前列腺癌血管生成、侵袭、转移的影响.利用液相色谱串联质谱技术对西黄丸的活性成分进行分析与鉴定.利用R语言和Perl语言程序等生物信息学技术分析前列腺癌相关靶点与西黄丸潜在靶点之间的相互作用.利用PC3细胞制备裸小鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,验证西黄丸的疗效和分子机制.体外细胞实验分别采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)法、Transwell、划痕实验、实时定量逆转录PCR和蛋白免疫印记实验检测西黄丸萃取液对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移以及FAK/Src/ERK通路相关靶点的影响.液相色谱串联质谱技术鉴定出没食子酸、龙胆酸、青蒿烯、柯里拉京、苯基丁酮-葡萄糖苷、苏木酸、arecoic acid B等在内的西黄丸99种活性成分.基于西黄丸活性成分的网络药理学分析显示,FAK/Src/ERK信号通路为其抗前列腺癌的关键途径.体内外实验结果验证,西黄丸能够抑制PC3、LNCaP细胞的增殖、侵袭与迁移,并抑制PC3皮下移植瘤的生长,降低FAK/Src/ERK信号通路相关蛋白表达水平.综上,通过调节FAK/Src/ERK通路抑制血管生成、侵袭、迁移是西黄丸抗前列腺癌机制之一.

    西黄丸前列腺癌FAK/Src/ERK信号通路血管生成

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    基于HSP90靶点调控的火把花根片抑制破骨细胞分化的作用机制研究

    陈沛萍汪倩黄凤玉孔祥英...
    6389-6398页
    查看更多>>摘要：旨在探讨火把花根片抗类风湿关节炎(RA)骨破坏的潜在作用及其分子机制.采用超高效液相色谱-质谱联用技术分析火把花根片的主要成分,并基于主要成分预测其候选靶标基因集.通过GeneCards和遗传学与医学文献数据库(OMIM)获取RA骨破坏的关键靶点,构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,并通过拓扑分析确定关键靶点.进一步利用基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析揭示火把花根片抗RA骨破坏的分子机制.通过MTS实验评估火把花根片对巨噬细胞活力的影响,筛选无毒浓度.构建核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的体外破骨细胞分化模型.采用酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和纤维形肌动蛋白环(F-actin)染色观察破骨细胞形成和分化情况,同时通过免疫荧光法和Western blot法检测火把花根片对破骨细胞分化体系中核心靶点蛋白变化的影响.结果显示,火把花根片的主要成分包括雷公藤甲素、雷公藤红素、雷酚内酯等14种化合物.进一步网络分析表明,热休克蛋白90(HSP90)是火把花根片抗RA骨破坏的关键靶基因.TRAP染色和F-actin染色结果显示,火把花根片干预后,TRAP阳性多核细胞以及肌动蛋白环的数量和面积呈剂量依赖性降低(P<0.01).Western blot结果表明,20、40μg·mL-1火把花根片干预后,HSP90蛋白表达显著降低(P<0.01),10μg·mL-1火把花根片可降低肿瘤坏死因子受体相关分子6(TRAF6)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)蛋白表达(P<0.01),各剂量火把花根片可显著降低破骨分化标志性蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)、组织蛋白酶K(CTSK)表达(P<0.01).免疫荧光结果进一步证实,火把花根片明显抑制破骨细胞中HSP90和CTSK水平,以及NFATc1的活化.综上,该研究证实火把花根片可能通过调控HSP90这一关键靶点抑制RANKL诱导破骨细胞分化从而发挥抗RA骨破坏作用,这将为火把花根片防治RA骨破坏提供新的思路.

    火把花根片热休克蛋白90类风湿关节炎骨破坏

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    基于NLRP3/caspase-1/GSDMD通路探讨扶正通络颗粒对肺纤维化大鼠模型巨噬细胞焦亡的影响

    陈凤段乃凡张兴张炜...
    6399-6406页
    查看更多>>摘要：探讨扶正通络颗粒对特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的治疗作用及其机制.将72只SD大鼠随机分为对照组,模型组,吡非尼酮组(162 mg·kg-1)以及扶正通络颗粒低、中、高剂量组(2.63、5.25、10.5 g·kg-1),采用单次无创气管插管滴注博来霉素(bleomycin,BLM)诱导IPF大鼠模型.造模第2天后每日灌胃,并记录体质量.第28天取材,称量肺质量,计算肺系数,HE、Masson染色观察肺组织病理变化,碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,ELISA法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleu-kin-18,IL-18)含量,免疫组化观察 α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)表达,Western blot检测肺组织NOD样蛋白受体3(NOD-,LRR-and pyrin domain-containing 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteine-requiring aspartate protease type 1,caspase-1)、消皮素D-N(gasdermin D-N,GSDMD-N)、凋亡相关斑点样蛋白(apopto-sis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)蛋白表达,免疫荧光共定位观察GSDMD和CD68的表达.结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肺系数、Ashcroft评分、Szapiel评分增加,肺组织HYP、TNF-α、IL-1β、IL-18含量增加,NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、ASC蛋白表达升高,GSDMD、CD68表达增加,GSDMD与CD68存在高度共定位.与模型组比较,各给药组大鼠肺系数、Ashcroft评分、Szapiel评分降低,肺组织HYP、TNF-α、IL-1β、IL-18含量减少,NLRP3、caspase-1、GSDMD、ASC蛋白表达下降,GSDMD、CD68表达减少,GSDMD与CD68存在高度共定位.综上所述,扶正通络颗粒可有效改善IPF大鼠肺组织纤维化和炎症,其机制可能与下调NLRP3/caspase-1/GSDMD通路抑制巨噬细胞焦亡有关.

    特发性肺纤维化扶正通络颗粒细胞焦亡NLRP3/caspase-1/GSDMD通路巨噬细胞

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    基于生物信息学和动物实验探讨苓桂术甘汤通过HIF-1α/HO-1信号通路改善心肌梗死后慢性心力衰竭的作用

    任涵王舒舒赵婉竹徐少华...
    6407-6416页
    查看更多>>摘要：该研究旨在通过联合生物信息学和体内实验探究苓桂术甘汤(LGZGD)对心肌梗死(MI)诱导的慢性心力衰竭(CHF)小鼠心功能、心肌细胞自噬水平的影响,以及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的调控作用.TCMSP数据库获取苓桂术甘汤活性成分及对应靶点,GEO、GeneCards和DisGeNET数据库收集疾病靶点;运用Cytoscape软件绘制"药物-成分-靶点"网络,在STRING网站进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络分析,R语言进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;分子对接验证核心靶点.采用手术结扎左前降支冠状动脉法构建MI后CHF小鼠模型,分为假手术组,模型组,苓桂术甘汤低、中、高剂量组(2.34、4.68、9.36 g·kg-1),卡托普利组(3.25 mg·kg-1).连续给药6周后使用多普勒超声成像系统检测小鼠心功能,包括左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd);HE染色观察小鼠心肌组织形态学变化;RT-qPCR法检测小鼠心肌组织微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、自噬效应蛋白1(Beclin1)、自噬降解底物(p62)、HIF-1α、HO-1 mRNA表达水平;Western blot法检测小鼠心肌组织LC3B、Beclin1、p62、自噬相关蛋白5(ATG5)、HIF-1α、HO-1蛋白表达水平.网络药理学结果显示,共得到苓桂术甘汤有效成分103个,对应靶点224个,MI、CHF相关靶点分别为3485、6165个,GSE16499数据集获取差异基因3263个,交集靶点共31个;核心药效成分为槲皮素、柚皮素和1-甲氧基菜豆素等;核心靶点为MAPK3、HMOX1(HO-1)、MYC、ADRB2、PPARD、HIF1A(HIF-1α)等;分子对接结果显示,核心靶点与苓桂术甘汤主要活性成分对接良好.苓桂术甘汤显著改善了MI后CHF小鼠的心功能,且心肌组织病理形态学变化明显减轻;Western blot和RT-qPCR结果显示模型组小鼠心肌组织中HIF-1α/HO-1信号通路和自噬过程被激活,但程度不足以改善MI后CHF,而苓桂术甘汤能显著上调小鼠心肌组织中LC3B、Beclin1、ATG5、HIF-1α、HO-1表达水平,并显著下调p62 mRNA和蛋白表达水平.综上所述,苓桂术甘汤能够增强MI后CHF小鼠心肌细胞自噬,改善小鼠心功能,此作用可能与HIF-1α/HO-1信号通路的上调密切相关.

    心肌梗死后慢性心力衰竭苓桂术甘汤网络药理学自噬HIF-1α/HO-1信号通路

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    基于代谢组学和肠道菌群探讨正清风痛宁缓释片治疗膝骨关节炎作用机制

    林青霞聂春梅车润莉戎宽...
    6417-6428页
    查看更多>>摘要：为深入阐明正清风痛宁缓释片对膝骨关节炎治疗效果及作用机制,该研究采用0.2 mL的40 g·L-1木瓜蛋白酶构建膝骨关节炎模型,造模成功后随机将大鼠分为模型组、正清风痛宁缓释片高剂量组、正清风痛宁缓释片低剂量组、塞来昔布组,持续给药4周且测定大鼠膝关节直径的变化.采用苏木精-伊红染色和番红固绿染色来观察SD大鼠膝关节组织的病理学情况.通过检测大鼠血浆中白细胞介素(IL)-1β 和IL-6的含量初步评价正清风痛宁缓释片对膝骨关节炎大鼠的治疗作用.基于非靶向代谢组学技术和16S rRNA技术联合测定大鼠内源性小分子物质和肠道菌群的变化,找出潜在的生物标志物.结果表明,正清风痛宁缓释片可改善膝骨关节炎大鼠膝关节肿胀直径,改善软骨组织病理损伤并降低大鼠血浆中IL-1β和IL-6的含量.代谢组学分析筛选出22个与正清风痛宁缓释片调节效应相关的潜在生物标志物,包括5-羟色胺、皮质酮、甲基丙二酸等生物标志物,其主要涉及色氨酸代谢、维生素K代谢、类固醇合成等8条代谢通路.肠道菌群结果表明模型组肠道菌群多样性下降,给药后肠道菌群多样性增加且肠道菌群微生态得以改善.显著性差异菌有Lachnospiraceae_NK4A136_group、Heli-cobacter、Lactobacillus、Bacteroides、Parabacteroides.联合分析结果表明22个生物标志物与5类菌属存在一定关联性.以上结果说明正清风痛宁缓释片可改善膝关节组织形态结构、降低血浆炎症因子水平、调节肠道菌群多样性、平衡类固醇合成、维生素K代谢和色氨酸代谢等代谢通路发挥对膝骨关节炎的治疗作用.

    代谢组学肠道菌群膝骨关节炎正清风痛宁缓释片

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    痰瘀同治方基于TGF-β信号通路维持血管稳态治疗动脉粥样硬化的机制研究

    崔晓珊张会雨陈原原李亮...
    6429-6438页
    查看更多>>摘要：以转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD家族成员2/3(Smad2/3)信号通路为切入点,探讨痰瘀同治方治疗小鼠动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制及组方配伍意义.8只C57BL/6J小鼠作为正常组,给予普通饲料喂养,35只同品系ApoE-/-小鼠通过高脂饲料喂养8周制备AS模型.造模成功后随机分为模型组、痰瘀同治组(18.2 mg·kg-1)、化痰组(10.4mg·kg-1)、祛瘀组(7.8 mg·kg-1)各8只.除正常组外,其余各组均采用高脂饲料连续8周喂养制备AS模型,之后各组小鼠均灌胃给药8周.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)水平;苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色及Russell-Movat五色染观察小鼠主动脉组织的病理学形态变化,并计算主动脉斑块面积占比、红染脂质面积占比、胶原纤维及弹力纤维占比;免疫荧光法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)及组织金属蛋白酶抑制物2(TIMP2)蛋白表达水平;Western blot检测主动脉TGF-β1、TGF-β2、Smad2/3、Smad7的蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织转化生长因子-β受体(TGF-βR)、TGF-β1、Smad2/3、Smad7、细胞黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA表达量.结果显示,与正常组比较,模型组血浆TC、LDL-C升高,HDL-C显著降低;血浆IL-1β、IL-18显著升高;主动脉斑块面积占比、红染脂质面积占比及胶原纤维占比增加;主动脉弓中MMP2表达显著上调,TIMP2表达显著下调;主动脉组织TGF-βR、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白及mRNA表达水平显著升高,Smad7表达水平降低;与模型组比较,痰瘀同治组血浆TC、LDL-C显著降低,HDL-C显著升高;血浆IL-1β、IL-18显著降低;主动脉斑块明显缩小,主动脉斑块病变程度显著减小;主动脉弓中MMP2表达明显下调;ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平显著降低;主动脉组织TGF-β1、p-Smad2/3蛋白及mRNA表达水平显著降低,Smad7蛋白表达水平不同程度升高;与痰瘀同治组比较,祛瘀组LDL-C显著升高,血浆IL-1β、IL-18升高;化痰组主动脉弓中MMP2表达上调,TIMP2表达下调.综上,痰瘀同治方基于痰毒、瘀血致病组方配伍而成,化痰组主要发挥调节血脂代谢、调控炎症因子等作用,而祛瘀组主要发挥维持血管壁通透性、抑制斑块发展、稳定斑块的作用,全方维持血管稳态,其作用机制可能涉及抑制主动脉中TGF-β1的表达,减少Smad2/3的磷酸化,同时提高Smad7的表达水平.

    动脉粥样硬化痰瘀同治方血管稳态TGF-βSmad2/3Smad7

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    大黄酚调节NF-κB/HMGB1-PI3K/Akt/mTOR轴抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化机制研究

    吴春林胡亚男刘毅强黎晖...
    6439-6449页
    查看更多>>摘要：旨在探讨大黄酚(chrysophanol,Chr)减轻氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致炎症和泡沫细胞形成的潜在机制,探索大黄酚与冠状动脉粥样硬化的相关作用靶点及通路,为临床新药研发提供理论依据.采用体外培养RAW264.7巨噬细胞,通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)确定大黄酚和ox-LDL对RAW264.7巨噬细胞适当给药浓度后,用不同浓度的大黄酚(10、15μmol·L-1)、不同浓度的ox-LDL(含或不含80 mg·mL-1)处理RAW264.7巨噬细胞24 h,即将RAW264.7巨噬细胞分为4组,对照组、模型组(80 mg·mL-1ox-LDL)、大黄酚低剂量组(80 mg·mL-1ox-LDL+大黄酚10μmol·L-1)、大黄酚高剂量组(80 mg·mL-1ox-LDL+大黄酚15μmol·L-1),并用油红O染色检测各组的脂质累积情况、流式细胞术分析各组中白细胞分化抗原36(CD36)的表达情况、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测A1类清道夫受体(SR-A1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)、自噬相关蛋白5(Atg5)、苄氯素1(Beclin1)、自噬衔接蛋白p62(P62)、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ与LC3Ⅰ比值(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)和核转录因子κB P65(NF-κB P65)、抑制性κB激酶β(IKKβ)、核因子κB激酶亚基β 抑制因子(IκB)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)磷酸化的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、HMGB1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)、巨噬细胞半乳糖型凝集素-1(Mgl-1)和NF-κB P65的mRNA表达水平,免疫荧光分析确定HMGB1在各组RAW264.7细胞中的定位,后增加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)作为抑制剂对照进行反向验证,即重新将RAW264.7巨噬细胞分成4组,对照组、模型组(80 mg·mL-1 ox-LDL组)、给药组(80 mg·mL-1 ox-LDL+大黄酚15μmol·L-1)、抑制剂组(80 mg·mL-1ox-LDL+大黄酚15μmol·L-1+3-MA)进行以上实验.结果显示大黄酚通过调节SR-A1、ABCA1、ABCG1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Atg5、Beclin-1和p62的表达水平,同时还抑制NF-κB/HMGB1-PI3K/Akt/mTOR信号通路,从而有效地减少泡沫细胞形成,并且大黄酚对自噬和NF-κB/HMGB1-PI3K/Akt/mTOR通路的抑制作用可被自噬抑制剂3-MA逆转.综上所述,大黄酚通过诱导自噬和调节NF-κB/HMGB1和PI3K/Akt/mTOR通路,抑制巨噬细胞炎症泡沫细胞的形成,具有治疗动脉粥样硬化的潜力.

    动脉粥样硬化大黄酚炎症自噬泡沫细胞形成NF-κB/HMGB1PI3K/Akt/mTOR

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