查看更多>>摘要:目的 本研究通过分析circMFSD12在结直肠癌中的表达及对肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,以及对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响,从而分析其作为潜在治疗靶点的可行性,以期为结直肠癌治疗提供新思路.方法 检索公开数据库中有关结直肠癌组织、正常结肠组织和正常肠组织的人源RNA数据集(GSE172229,GSE166973,GSE147597),并筛选在结直肠癌中表达下调的circRNA,从而通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析circMFSD12在结直肠癌细胞株中的表达水平.基于构建过表达circMFSD12的质粒并转染结直肠癌细胞株LoVo和SW620,通过EdU染色、划痕实验和Transwell实验评估其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响.同时,通过CCK8实验和流式细胞术实验检测其对5-FU敏感性的影响,从而进一步通过生物信息学分析和miRNA pull down实验研究其潜在的分子机制.结果 circMFSD12在结直肠癌组织(筛选标准:logFC<-0.5)和细胞(circMFSD12表达量在人正常结肠上皮细胞NCM460为1.00±0.14,在结直肠癌细胞中分别为 HCT116:0.72±0.08、LoVo:0.42±0.10、SW480:0.72±0.04 和 SW620:0.48±0.07)中均表达下调(P<0.05).体外实验结果显示,过表达circMFSD12显著抑制结直肠癌细胞的增殖(LoVo:52%±5.3%vs.22%±3.7%,P<0.001;SW620:56%±10%vs.26%±4.0%,P<0.001)、迁移(LoVo:75%±5.5%vs.34%±5.7%,P<0.001;SW620:54%±7.5%vs.22%±5.6%,P<0.001)和侵袭(LoVo:104±18.6vs.41.7±10.2,P<0.01;SW620:86.7±16.5 vs.34.7±4.9,P<0.01),并增强了细胞(LoVo:Control:2.5±0.7 vs.7.4±1.0,P<0.01,5-FU:11.8±1.9 vs.28.6±1.9,P<0.001;SW620:Control:2.2±0.4 vs.8.1±1.3,P<0.01,5-FU:10.2±1.4 vs.23.4±2.3,P<0.001)对 5-FU 的敏感性.生物信息学分析及实验验证表明,通过调节靶向miR-887-3p和PPP1R12B表达,circMFSD12对结直肠癌细胞的生物行为有抑制作用.结论 circMFSD12调控miR-887-3p/PPP1R12B,从而显著影响结直肠癌细胞的生物行为,表明其作为新型分子标志物和潜在治疗靶点有良好的研究前景.