查看更多>>摘要：目的 探讨海藻糖凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面及兔耳瘢痕增生的影响.方法 该研究为实验研究.制备海藻糖凝胶和卡波姆凝胶,辐照灭菌后观察其外观并检测其粘度、成模率、阻菌率、重金属含量、保湿率、水蒸气透过率、无菌性等理化特性和细胞毒性、皮内刺激、致敏性等生物相容性.取30只8～10周龄雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为实验组、阳性对照组、阴性对照组,每组10只.在阴性对照组、阳性对照组、实验组大鼠背部制备全层皮肤缺损创面模型,分别进行常规换药、卡波姆凝胶换药、海藻糖凝胶换药处理.统计伤后6、12d创面愈合率并记录创面愈合时间.伤后6 d,采用透射电镜观测大鼠创面组织中自噬体和自噬溶酶体数量,采用酶联免疫吸附测定法检测大鼠创面组织中微管相关蛋白轻链3 Ⅰ(LC3 Ⅰ)和LC311含量并计算其比值,采用天狼星红-苦味酸染色法检测大鼠创面组织中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白占比及其比值和总胶原蛋白占比.前述实验样本数均为5.取3只3～4个月龄雄性新西兰白化模型兔,在每侧兔耳各制备3个深达软骨膜的创面,同前进行分组和处理,每组6个创面.创面愈合后30 d,大体观察并使用温哥华瘢痕量表评估兔耳瘢痕情况,采用苏木精-伊红染色检测兔耳瘢痕组织中表皮和真皮的厚度,采用天狼星红-苦味酸染色检测兔耳瘢痕组织中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白占比及其比值和总胶原蛋白占比及其排布情况.样本数为6.结果 辐照后的海藻糖凝胶和卡波姆凝胶均呈淡黄色透明状,无异味和杂质.海藻糖凝胶粘度、成膜率、阻菌率、保湿率均显著优于卡波姆凝胶(t值分别为4.13、3.50、4.03、5.80,P＜0.05),但水蒸气透过率显著低于卡波姆凝胶(t=-4.14,P＜0.05).2种凝胶均未检出重金属和细菌.2种凝胶均无细胞毒性,皮内刺激和致敏性均为阴性.伤后6、12d,阳性对照组大鼠创面愈合率均明显高于阴性对照组(t值分别为-6.82和-4.58,P＜0.05),实验组大鼠创面愈合率均明显高于阳性对照组(t值分别为-8.90和-4.25,P＜0.05)和阴性对照组(t值分别为-8.78和-4.25,P＜0.05).阳性对照组和实验组大鼠创面愈合时间分别为(20.4±2.5)、(23.4±2.5)d,均明显短于阴性对照组的(27.0±2.1)d(t值分别为2.45、-4.49,P＜0.05).伤后6 d,实验组大鼠创面组织中自噬体和自噬溶酶体数量均显著多于阳性对照组(t值分别为7.37和9.33,P＜0.05)和阴性对照组(t值分别为-7.06和-8.54,P＜0.05).伤后6d,阳性对照组大鼠创面组织中LC3 Ⅱ含量及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ均显著高于阴性对照组(t值分别为-4.48和-2.47,P＜0.05);实验组大鼠创面组织中LC3Ⅱ含量及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ均显著高于阴性对照组(t值分别为11.98和6.04,P＜0.05)和阳性对照组(t值分别为-6.64和-4.17,P＜0.05),LC3 Ⅰ含量明显低于阴性对照组(t=2.33,P＜0.05).伤后6d,3组大鼠创面组织中总胶原蛋白和Ⅰ型胶原蛋白占比均相近,P＞0.05.伤后6 d,阳性对照组大鼠创面组织中Ⅲ型胶原蛋白占比显著高于阴性对照组(t=-3.19,P＜0.05),且Ⅰ型胶原蛋白/Ⅲ型胶原蛋白显著低于阴性对照组(t=2.18,P＜0.05);实验组大鼠创面组织中Ⅲ型胶原蛋白占比显著高于阴性对照组和阳性对照组(t值分别为-2.38和5.91,P＜0.05),且Ⅰ型胶原蛋白/Ⅲ型胶原蛋白显著低于阴性对照组和阳性对照组(t值分别为3.08和-4.35,P＜0.05).创面愈合后30d,可观察到阳性对照组兔耳瘢痕增生情况与阴性对照组相近,而实验组兔耳瘢痕增生情况明显减轻.创面愈合后30 d,实验组兔耳瘢痕色泽、血管、厚度、硬度评分及总分均明显低于阳性对照组(t值分别为3.80、3.80、2.39、2.71、4.84,P＜0.05)和阴性对照组(t值分别为-3.81、-4.78、0.04、-2.71、-5.14,P＜0.05).创面愈合后30 d,实验组、阴性对照组和阳性对照组兔耳瘢痕组织中表皮厚度相近(P＞0.05);阳性对照组兔耳瘢痕组织真皮厚度明显小于阴性对照组(t=5.42,P＜0.05),实验组兔耳瘢痕组织真皮厚度明显小于阴性对照组和阳性对照组(t值分别为 11.91和8.49,P＜0.05).创面愈合后30d,3组兔耳瘢痕组织中胶原蛋白排列均紊乱,总胶原蛋白占比相近(P＞0.05);实验组兔耳瘢痕组织中Ⅰ型胶原蛋白占比明显低于阳性对照组(t值分别为3.00,P＜0.05),Ⅲ型胶原蛋白占比明显高于阴性对照组和阳性对照组(t值分别为-4.46和4.05,P值均＜0.05),Ⅰ型胶原蛋白/Ⅲ型胶原蛋白明显低于阴性对照组和阳性对照组(t值分别为8.50和-5.25,P值均＜0.05).结论 海藻糖凝胶相较于卡波姆凝胶具有更适于创面愈合的理化特性,且生物相容性良好;能基于自噬激活作用促进大鼠全层皮肤缺损创面愈合,减轻兔耳瘢痕增生.
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