查看更多>>摘要:目的 探讨叉头盒KI(forkhead box K1,FOXK1)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用及机制,以期为AKI的防治提供新的思路和靶点.方法 构建3种AKI模型:按随机数字表法将30只雄性8~10周龄22~24 g无特定病原体野生型C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组(0.9%氯化钠水溶液0.1 ml/10 g,腹腔注射)、脂多糖组(脂多糖溶液10 mg/kg,腹腔注射)、顺铂组(顺铂溶液20 mg/kg,腹腔注射)、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)组及假手术组,每组6只,各组小鼠均于造模24 h后处死取材.肾功能情况通过检测血肌酐、血尿素氮水平;HE染色法观察各组肾组织病理学改变;Western印迹法检测肾组织FOXK1、肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,KIM-1)以及自噬标志物p62、Beclin1和LC3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测Foxk1mRNA表达水平.予以人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧24 h、复氧6 h构建缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)诱导AKI体外模型,检测HK-2细胞上述指标表达水平.同时,在体内外构建Foxk1基因缺失的肾小管上皮细胞小鼠或HK-2细胞,并诱导建立AKI模型,观察上述各指标表达变化.结果 与生理盐水组相比,脂多糖组及顺铂组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高,KIM-1蛋白表达较高(均P<0.05),FOXK1蛋白和mRNA表达无明显改变(均P>0.05);与假手术组相比,IR组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高,KIM-1蛋白表达较高,FOXK1蛋白和mRNA表达均较低(均P<0.05).与对照组比较,体外HR诱导的AKI细胞模型中FOXK1蛋白和mRNA表达均较低(均P<0.05).体内实验中,与假手术组相比,IR组肾小管损伤较重,血肌酐、血尿素氮均较高,p62蛋白表达较低,KIM-1、Beclin1和LC3蛋白表达均较高(均P<0.05),且与Foxk1flox/floxIR组相比,Foxk1cKO IR组肾小管损伤明显较轻,血肌酐、血尿素氮均较低,KIM-1、p62蛋白表达均较低,Beclin 1和LC3蛋白表达均较高(均P<0.05).体外实验中,与shCtrl HR组比较,shFoxk1 HR组KIM-1、p62蛋白表达均较低,Beclin1、LC3蛋白均较高(均P<0.05).结论 FOXK1在缺血性AKI模型中表达降低.Foxk1基因缺失通过介导自噬激活,减轻肾小管上皮细胞损伤,保护缺血性AKI.