查看更多>>摘要：[目的]探究防风(Saposhnikovia divaricata,SD)提取物对大鼠嗜碱性白血病细胞RBL-2H3脱颗粒的影响及作用机制.[方法]采用噻唑蓝(methylthialazole tetrazolium,MTT)比色法检测,根据5、25、50、100、200、400 μg·mL-1SD提取物对RBL-2H3 细胞活性的影响,确定后续实验浓度.以免疫球蛋白E(immunoglobulinE,IgE)诱导建立RBL-2H3细胞脱颗粒模型.设立空白对照组、模型组、低剂量SD提取物组(5 μg·mL-1)、中剂量SD提取物组(25 μg·mL-1)、高剂量SD提取物组(50 μg·mL-1)和地塞米松(dexamethasone,DXMS)组(100 μg·mL1),干预30 min.MTT法检测低、中、高剂量SD提取物对RBL-2H3细胞脱颗粒模型活性的影响.甲苯胺蓝染色观察脱颗粒细胞形态,计算细胞脱颗粒率.免疫荧光染色测定细胞F-肌动蛋白(F-actin)表达.酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞β-氨基己糖苷酶、组胺、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平.免疫印迹法检测细胞磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)、磷酸化-PI3K(phosphorylation-PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶 B(protein kinase B,AKT)、磷酸化-AKT(phosphorylation-AKT,p-AKT)、p38 丝裂原 活化蛋 白激酶(p3 8 mitogen activited protein kinaseelisa,p38MAPK)、磷酸化-p38MAPK(phosphorylation-p38MAPK,p-p38MAPK)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、磷酸化-NF-κB(phosphorylation-NF-κB,p-NF-κB)、细胞外调节激酶(extracellular regulated kinases,ERK)、磷酸化-ERK(phosphorylation-ERK,p-ERK)蛋白表达.[结果]低、中、高剂量防风提取物(5、25、50 μg·mL-1)对RBL-2H3细胞活性无显著影响(P＞0.05).与空白对照组比较,模型组甲苯胺蓝染色细胞数量减少、形态变圆,细胞脱颗粒率显著上升,F-actin表达下降,β-氨基己糖苷酶、组胺、IL-4、IL-6、TNF-α 水平升高,IFN-γ 水平降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-KB/NF-KB、p-ERK/ERK表达升高(P＜0.01).与模型组比较,低、中、高剂量SD提取物组和DXMS组细胞F-actin表达增加,β-氨基己糖苷酶、组胺、IL-4、IL-6、TNF-α 释放显著下降(P＜0.05,P＜0.01),IFN-γ 释放显著增加(P＜0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB/NF-κB、p-ERK/ERK表达降低(P＜0.05,P＜0.01);中、高剂量SD提取物组和 DXMS组细胞数量增加,形态多呈梭形,细胞脱颗粒率显著下降(P＜0.01).与低剂量SD提取物组比较,高剂量SD提取物组和DXMS组细胞脱颗粒率下降(P＜0.01)、F-actin表达增加(P＜0.05)、p-p38MAPK/p38MAPK表达降低(P＜0.01).[结论]SD提取物可抑制 IgE 致敏的 RBL-2H3细胞脱颗粒,降低炎性介质水平,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT、p38MAPK/NF-κB、ERK蛋白磷酸化有关.
NETL
NSTL
万方数据