查看更多>>摘要：目的 探讨利多卡因(Lidocaine,Lido)通过调节环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(Cyclic guanosine monophosphate synthase,cGAS)-干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎性损伤的影响及其作用机制.方法 0～200 μg/mL的利多卡因处理LPS诱导的BV2小胶质细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl-tetrazolium,MTT)测定细胞活性,选择最佳药物水平;将BV2细胞分为对照组(Control组)、LPS诱导组(LPS组,1 μg/mL LPS)、利多卡因低水平组(Lido-L 组,2 μg/mL Lido+1 μg/mLLPS)、利多卡因中水平组(Lido-M 组,20 μg/mL Lido+1μg/mL LPS)、利多卡因高水平组(Lido-H组,200 μg/mL Lido+1 μg/mL LPS)和利多卡因高水平+STING激活剂 DMXAA 组(Lido-H+DMXAA 组,200 μg/mL Lido+1 μg/mL LPS+100 μg/mL DMXAA);Griess法检测NO水平;酶联免疫吸附法((Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte ehemoattractant protein-1,MCP-1)、前列腺素 E2(Prostaglandin E2,PGE2)、环氧化酶 2(Cyclooxy-ge-nase 2,COX-2)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin,IL)-10 和 IL-1β水平;Hoechst染色检测细胞凋亡;免疫荧光检测钙离子结合调节因子(Ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba-1)和精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)表达水平;Western blot检测环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(Cy-clic guanosine monophosphate synthase,cG AS)、干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体 3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)蛋白水平.结果 0～200 μg/mL的利多卡因能增加LPS诱导的BV2细胞活力,选择2、20和200μg/mL的利多卡因进行后续实验.与Control组比较,LPS组BV2细胞出现大量细胞发生凋亡现象,TNF-α,IL-1β、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、PGE2,MCP-1 和 COX-2 水平、Iba-1 阳性表达率及 Cgas,STING 和 NL-RP3蛋白表达水平显著增高,IL-10水平和Arg-1阳性表达率显著降低(P＜0.05);与LPS组比较,Lido-L组、Lido-M 组和 Lido-H 组 BV2 细胞凋亡逐渐减少,TNF-α,IL-1 β,NO,PGE2,MCP-1 和 COX-2 水平、Iba-1 阳性表达率及cGAS,STING和NLRP3蛋白表达水平显著降低,IL-10水平和Arg-1阳性表达率显著增高,且呈水平依赖性(P＜0.05);与Lido-H组比较,Lido-H+DMXAA组BV2细胞凋亡增加,TNF-α,IL-1β,NO,PGE2,MCP-1和COX-2水平、Iba-1阳性表达率及cGAS,STING和NLRP3蛋白表达水平显著增高,IL-10水平和Arg-1阳性表达率显著降低(P＜0.05).结论 利多卡因对LPS诱导的小胶质细胞炎性损伤的保护作用机制可能与抑制cGAS-STING信号通路的激活有关.
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