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产物可直接进行"TA"克隆的高保真PCR法

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[目的]介绍一种PCR产物直接进行"TA"克隆的高保真PCR法,减少高保真PCR产物"TA"克隆的中间步骤.[方法]Trizol法提取人肝癌细胞SMMC-7721总RNA,并将mRNA反转录成cDNA.以cDNA为模板,联合不同特性的Taq DNA聚合酶扩增PKC基因的蛋白编码区.PCR产物经纯化后进行"TA"克隆、细菌转化、筛选培养、质粒抽提、酶切鉴定和测序鉴定等.[结果]高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物未发现DNA突变,但不能直接进行"TA"克隆.Taq DNA聚合酶扩增的产物可直接进行"TA"克隆,但其内部存在多个突变位点,保真性明显不足.联合使用高保真DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶(双酶联用)扩增的PCR产物可直接进行"TA"克隆,且DNA测序未发现突变.[结论]双酶联用PCR可以获得高保真PCR产物,并直接进行"TA"克隆.
A High-fidelity PCR Method with Its Product Used in"TA"Cloning Directly

孙达权、张钦真、胡桐、湛钊、石松、薛殿婷

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贵州医科大学基础医学院,贵州贵阳550025

聚合酶链式反应 DNA聚合酶 "TA"克隆 DNA突变

国家自然科学基金贵州省科学技术基金贵州省大学生创新创业项目贵州省大学生创新创业项目

81560390黔科合基础〔2017〕11472017106600342018520351

2020

安徽农业科学
安徽省农业科学院

安徽农业科学

影响因子：0.413
ISSN：0517-6611
年,卷(期)：2020.48(5)
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