摘要
[目的]建立枯草菌肽含量及纯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测方法.[方法]采用ZORBAX 300SB-C8(4.6 mm×150 mm,5μm),以三氟乙酸-水(1:1000)为流动相A,以三氟乙酸-水-乙腈(0.85:200:800)为流动相B;柱温25℃,检测波长280 nm,流速1.0 mL/min,进样量20μL,线性梯度洗脱.[结果]在室温条件下,枯草菌肽溶液12 h内稳定,RSD为0.61％;枯草菌肽主峰保留时间和峰面积的RSD分别为0.18％和0.22％,不同实验员间的RSD为0.92％;枯草菌肽的定量限(LOQ)为120 ng、检出限(LOD)为80 ng,在0.03125～2.00000 mg/mL线性关系良好(R2=1);平均回收率为101.49％(n=9),RSD为0.29％;改变柱温、流速和色谱柱批号,枯草菌肽理论塔板数均大于2000,分离度均大于1.5,相对保留时间(RRT)偏差绝对值均不大于20％.测定3批枯草菌肽含量分别为98.8％、99.8％ 和100.2％;纯度均大于99％.[结论]该研究建立的检测方法灵敏、准确、专属性强,符合定量检测枯草菌肽含量和纯度的要求,适用于枯草菌肽的质量控制.
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