摘要
[目的]开发一种用于牛源性成分检测的荧光实时定量检测方法.[方法]通过序列比对后,以牛源性线粒体DNA中cytb基因为模板,设计特异性的引物和探针,并以不同来源的DNA为模板,分析引物和探针的特异性.对牛源性DNA进行梯度稀释后,分析不同浓度下扩增曲线,分析检测方法的灵敏度.以牛源性DNA稀释液为模板,进行10个平行扩增试验,分析检测方法的精密度.[结果]该研究所用的引物和探针对牛源性DNA具有明显的扩增曲线,而对非牛源性(鸡、鸭、猪、人)DNA模板不进行扩增.灵敏度分析结果显示,该检测方法对浓度仅为24.4 pg/μL牛源性DNA模板仍进行阳性扩增.精密度分析显示,10个平行试验扩增曲线相似,Ct值的标准差(SD)仅为0.41,精密度(CV)也仅为1.6％.[结论]该研究开发的牛肉成分检测的荧光实时定量方法特异性高,仅对牛源性DNA发生扩增.同时该方法灵敏度也很好,检出限为24.4 pg/μL,精密度也很高,重复性良好,适用于市场上肉制品中牛源性成分的检测.
基金项目
广东省大学生攀登计划专项(pdjh2020b1009)
广州市科技计划(202002030422)
广东食品药品职业学院院级课题(2019ZR13)
广东食品药品职业学院院级课题(2019ZR17)
广东食品药品职业学院院级课题(2020ZR03)
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