安徽农业科学2022，Vol.50Issue(20) ：76-80.DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2022.20.020

犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达

Construction of Canine Melanocortin Receptor⁃4 Mutant D298N Eukaryotic Expression Vector and Its Expressed in MDCK Cells

宋立先 刘春红 王占青 高蓉 徐学振
安徽农业科学2022，Vol.50Issue(20) ：76-80.DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2022.20.020
✕
  • 国家科技期刊平台
  • NETL
  • NSTL
  • 维普
  • 万方数据

犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达

Construction of Canine Melanocortin Receptor⁃4 Mutant D298N Eukaryotic Expression Vector and Its Expressed in MDCK Cells

宋立先 1刘春红 1王占青 1高蓉 1徐学振1
扫码查看

作者信息

  • 1. 滨州医学院烟台附院,山东烟台264100
  • 折叠

摘要

[目的]引进犬MC4R突变点,构建突变体D298N表达载体并在MDCK细胞中获得表达.[方法]设计带突变点D298N引物,以犬MC4R基因组DNA为模板,采用普通PCR和Overlap-PCR扩增编码区,将产物克隆、酶切、测序鉴定.将测序正确的基因连接到pcD⁃NA3.1-myc-His/A载体上,将重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鉴定,将测序正确的重组体转染到MDCK细胞中,继续培养3 d,提取细胞总RNA,并采用RT-PCR方法检测基因表达.提取细胞总蛋白,Western Blot鉴定蛋白表达.[结果]构建带D298N突变点的真核表达载体,提取质粒后有2处碱基不同,分别是777位碱基T→C,892位碱基G→A(引入的突变位点).转染到MDCK后,RT-PCR和Western Blot均检测到重组体在基因水平和蛋白水平的表达.[结论]成功构建犬的重组体真核表达载体并在MDCK细胞中表达.

关键词

犬/黑皮质素受体-4/真核表达载体/定点诱变/D298N/MDCK细胞

引用本文复制引用

基金项目

辽宁省科技计划(2007408001-6)

出版年

2022
安徽农业科学
安徽省农业科学院

安徽农业科学

影响因子：0.413
ISSN：0517-6611
参考文献量3
段落导航相关论文