安徽农业科学2023，Vol.51Issue(9) ：73-76.DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2023.09.018

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

CRISPR/Cas9 Targeted Editing of OsPUX2 in Rice

高上 满淼淼 赵华 张丽娜 王加峰
安徽农业科学2023，Vol.51Issue(9) ：73-76.DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2023.09.018
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

CRISPR/Cas9 Targeted Editing of OsPUX2 in Rice

高上 1满淼淼 1赵华 2张丽娜 1王加峰1
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作者信息

  • 1. 华南农业大学国家植物航天育种工程技术研究中心,广东广州 510642
  • 2. 广州国家现代农业产业科技创新中心,广东广州 510520
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摘要

[目的]U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶(少部分属于泛素链聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用.为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsPUX2基因进行编辑.[方法]在OsPUX2第1外显子设计1个20 bp的编辑靶点,构建了OsPUX2基因敲除载体pRGEB32-OsPUX2-gRNA载体,并通过农杆菌介导的转化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈伤组织,经潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T0代转基因植株进行靶点区域序列进行PCR和测序分析,分析ospux2的突变类型.[结果]成功获得了ospux2的敲除突变体材料,对突变类型的分析发现,转基因编辑后代共存在7种突变类型,以缺失突变为主,其中一种纯合突变类型在OsPUX2第一个外显子的第115号碱基处缺失了一个C碱基,导致蛋白的翻译在第84个氨基酸处提前终止.[结论]该研究获得ospux2突变株系对进一步研究该基因的功能具有重要意义.

关键词

水稻/U-box/OsPUX2/CRISPR/Cas9/基因编辑

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基金项目

2021年省级乡村振兴战略专项(2021KJ382)

农业农村部华南现代生物种业重点实验室项目(2105-000000-20-03-457451)

出版年

2023
安徽农业科学
安徽省农业科学院

安徽农业科学

影响因子：0.413
ISSN：0517-6611
参考文献量2
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