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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

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[目的]U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶(少部分属于泛素链聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用.为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsPUX2基因进行编辑.[方法]在OsPUX2第1外显子设计1个20 bp的编辑靶点,构建了OsPUX2基因敲除载体pRGEB32-OsPUX2-gRNA载体,并通过农杆菌介导的转化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈伤组织,经潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T0代转基因植株进行靶点区域序列进行PCR和测序分析,分析ospux2的突变类型.[结果]成功获得了ospux2的敲除突变体材料,对突变类型的分析发现,转基因编辑后代共存在7种突变类型,以缺失突变为主,其中一种纯合突变类型在OsPUX2第一个外显子的第115号碱基处缺失了一个C碱基,导致蛋白的翻译在第84个氨基酸处提前终止.[结论]该研究获得ospux2突变株系对进一步研究该基因的功能具有重要意义.
CRISPR/Cas9 Targeted Editing of OsPUX2 in Rice

高上、满淼淼、赵华、张丽娜、王加峰

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华南农业大学国家植物航天育种工程技术研究中心,广东广州 510642

广州国家现代农业产业科技创新中心,广东广州 510520

水稻 U-box OsPUX2 CRISPR/Cas9 基因编辑

2021年省级乡村振兴战略专项农业农村部华南现代生物种业重点实验室项目

2021KJ3822105-000000-20-03-457451

2023

10.3969/j.issn.0517-6611.2023.09.018

安徽农业科学
安徽省农业科学院

安徽农业科学

影响因子：0.413
ISSN：0517-6611
年,卷(期)：2023.51(9)
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