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烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

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[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失.[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法.[结果]该方法特异性好,与其他常见的烟草病毒无交叉反应;灵敏度高,检测下限可达到4.53×101 copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍;建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R2)为0.993 3,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好,重复性试验结果可靠.[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品,检测结果一致,进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性.
Establishment of Real-time PCR Detection Method of Tobacco Mosaic Virus

吴彦辉、蒲团卫、张生杰、牛龙龙、白静科、李成军、李建华

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河南省烟草公司许昌市公司,河南许昌 461000

河南省农业科学院烟草研究所/烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南许昌 461000

烟草花叶病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针法

许昌市烟草公司科技项目

2021411000240104

2023

10.3969/j.issn.0517-6611.2023.12.039

安徽农业科学
安徽省农业科学院

安徽农业科学

影响因子：0.413
ISSN：0517-6611
年,卷(期)：2023.51(12)
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