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松材线虫效应因子基因筛选及Bx-Hh-grl功能研究

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[目的]通过对松材线虫效应因子基因的克隆和功能研究,揭示Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用,为防治松材线虫提供理论依据.[方法]用松材线虫Bx1022株系接种黑松,20 d后提取线虫总RNA进行转录组测序,将该转录组设为松材线虫植食阶段转录组.提取由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)培养的Bx1022的总RNA进行转录组测序,将该转录组设为菌食阶段转录组.比较分析两个转录组,筛选到差异表达基因Bx-Hh-grl.对Bx-Hh-grl编码蛋白质的跨膜结构域和信号肽进行预测.利用原位杂交检测Bx-Hh-grl表达部位.应用RNAi技术干扰Bx-Hh-grl表达以探究Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用.通过Q-PCR验证,确定RNAi效果显著.将经RNAi处理的松材线虫接种3年生黑松枝条,以未经处理的松材线虫(CK组)和ddH2O(Mock组)处理的黑松作为对照,比较黑松发病情况进而比较不同处理后松材线虫的致病性差异.[结果]筛选出植食阶段与菌食阶段转录组差异表达基因Bx-Hh-grl,其编码蛋白质具有跨膜结构域和信号肽.原位杂交试验结果显示Bx-Hh-grl在松材线虫食道腺表达,符合效应因子基因特征.Q-PCR结果显示经RNAi处理后的松材线虫Bx-Hh-grl表达量下调,RNAi处理效果显著.接种实验表明,Bx-Hh-grl-RNAi组显症的时间明显晚于CK组,Mock组黑松一直保持健康状态.[结论]Bx-Hh-grl是与松材线虫致病相关的效应因子基因.明确Bx-Hh-grl功能有利于进一步了解松材线虫致病机理,为降低松材线虫危害,防治松材线虫奠定理论基础.
Screening of effector genes of Bursaphelenchus xylophilus and the function of Bx-Hh-grl

曹淑可、零雅茗、吴昊、王佳楠、夏蕤、张悦、李丹蕾、姜生伟、王峰

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东北林业大学林学院,黑龙江省外来林木病虫害监测与防控重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150040

十万大山国家级自然保护区管理局,广西 防城港 535500

辽宁省林业和草原局有害生物防治检疫工作站,辽宁 沈阳 110001

沈阳工学院,辽宁省危险性林业有害生物防控重点实验室,辽宁 沈阳 110001

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松材线虫 效应因子 RNAi 原位杂交

2019JH2/1020000131971656201910225012

2021

10.12171/j.1000-1522.20210002

北京林业大学学报
北京林业大学

北京林业大学学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.237
ISSN：1000-1522
年,卷(期)：2021.43(9)
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