[目的]芍药具有极佳的观赏价值,但其种子的双重休眠难以解除,严重阻碍芍药的育种进程.本研究利用gateway技术构建芍药种子休眠解除关键时期的酵母杂交cDNA文库,可用于筛选调控芍药种子休眠解除相关基因的转录因子及互作蛋白.本文库的构建可为丰富芍药种子休眠调控研究提供科学支撑,能为芍药栽培育种和野生资源保护及利用奠定分子理论基础.[方法]本研究以休眠解除过程中 5 个关键时期的芍药种子为试验材料,进行总RNA的提取和mRNA的分离,使用gateway方法构建cDNA初级文库,再通过LR重组,将初级文库重组到pGADT7-DEST次级文库载体上,构建出次级文库,最后经过酵母转化试验,将次级文库质粒转化到酵母Y187 感受态细胞中,构建出芍药种子休眠解除过程的酵母文库.[结果]经鉴定,cDNA初级文库库容量为 1.28×107 CFU,平均插入片段长度在 1000 bp以上,重组率为 100%;cDNA次级文库库容量为 1.12×107 CFU,平均插入片段长度在 1000 bp以上,重组率为 100%;酵母文库滴度为 7.0×107 CFU/mL,平均插入片段长度在 1000 bp以上,重组率为 96%.23 个阳性克隆测序结果经NCBI比对后,按照功能将 20个已知蛋白序列划分为 8类,其中 7 个序列已被报道参与种子的休眠与萌发.[结论]芍药种子休眠解除过程的酵母杂交cDNA文库构建的质量较高,具有较完整的基因信息,符合酵母文库筛选试验所需的标准,为构建芍药种子休眠解除过程的分子调控网络提供基础.
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