脑心肌炎病毒VP1基因的克隆与原核表达

Cloning and prokaryotic expression of VP1 gene of encephalomyocarditis virus

阮峥 ¹王彤彤 ¹常心雨 ¹于璐 ¹李焕荣 ¹贾红²

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作者信息

1. 北京农学院动物科学技术学院,北京102206
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193
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摘要

[目的]为获得重组脑心肌炎病毒VP1蛋白.[方法]利用RT-PCR方法对脑心肌炎病毒的VP1基因进行特异性扩增,并在pEASY-Blunt Zero载体中进行克隆.测序正确后,用Nde Ⅰ和Hind Ⅲ对重组质粒进行双酶切,将目的片段连接入原核表达载体pET-30a,提取质粒pET-30a-VP1,将质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达和纯化.[结果]重组的结构蛋白VP1以包涵体的形式存在,纯化后获得的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在31.5 kD处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-30a-VP1.[结论]以原核系统成功表达脑心肌炎病毒VP1蛋白,进一步为犬的脑心肌炎病毒的血清学检测奠定基础.

关键词

脑心肌炎病毒/VP1基因/克隆/原核表达

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基金项目

人才培养质量建设-高水平人才交叉培养-实培计划(市级)(PXM2018 _ 014207 _ 000022)

出版年

2020

北京农学院学报

北京农学院

北京农学院学报

影响因子：0.539

ISSN：1002-3186

被引量1

参考文献量3

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