牛妊娠相关糖蛋白boPAG2双抗体夹心ELISA体系的建立

Establishment of a double antibody sandwich ELISA system for bovine pregnancy associated glycoprotein boPAG2

祁文婧 ¹张帅 ¹赵鑫 ¹张红星 ¹谢远红 ¹金君华 ¹刘慧¹

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作者信息

1. 食品质量与安全北京实验室/北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心/农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/微生态制剂关键技术开发北京市工程实验室/北京农学院食品科学与工程学院,北京102206
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摘要

[目的]通过双抗体夹心ELISA体系实现对牛妊娠相关糖蛋白boPAG2的免疫学检测,为后续研发牛妊娠检测试剂盒奠定基础.[方法]将自制boPAG2作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,以细胞融合技术对呈阳性的杂交瘤细胞进行筛选.运用ELISA相加性试验筛选最佳配对抗体,初步建立起双抗体夹心酶联免疫吸附试验系统,采集牛场中120头荷斯坦奶牛血清样本进行初筛.[结果]筛选出3株能稳定分泌boPAG2单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2C01,5E02,3B05.纯化出单克隆抗体滴度为(1∶22.48×104)～(1∶ 11.96×104),免疫球蛋白亚型均为IgG.ELISA相加性试验筛选出2株可识别boPAG2抗原不同表位的最佳配对抗体5E02和3B05.当5E02作为包被抗体,3B05作为检测抗体时,其最佳稀释质量浓度为1.25μg/mL,检测boPAG2的灵敏度可达5μg/mL.[结论]制备和选定了两株最佳配对单克隆抗体5E02和3B05,该对抗体效价高,通过建立双抗体夹心ELISA体系实现对boPAG2的免疫学检测,并对少量血清样品进行了初步鉴定.

关键词

牛/妊娠相关糖蛋白/单克隆抗体/双抗体夹心ELISA体系

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基金项目

食品质量与安全北京实验室资助项目()

出版年

2020

北京农学院学报

北京农学院

北京农学院学报

影响因子：0.539

ISSN：1002-3186

被引量7

参考文献量7

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