北京农学院学报2021，Vol.36Issue(4) ：1-6.DOI:10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2021.0401

非洲猪瘟病毒UBCv1的原核表达及多抗制备

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of ubiquitin-conjugating enzyme from African swine fever virus

蒋思文 房立春 冯泽新 焦鹏 王玥超 梁艳 史东宇 陈青
北京农学院学报2021，Vol.36Issue(4) ：1-6.DOI:10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2021.0401
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非洲猪瘟病毒UBCv1的原核表达及多抗制备

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of ubiquitin-conjugating enzyme from African swine fever virus

蒋思文 1房立春 2冯泽新 1焦鹏 1王玥超 1梁艳 1史东宇 1陈青1
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作者信息

  • 1. 北京农学院生物与资源环境学院/农业农村部华北都市农业重点实验室,北京102206
  • 2. 山东省农业科学院,济南250100
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摘要

[目的]为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)泛素结合酶(UBCv1)的生物学功能及致病机制奠定基础.[方法]以p3XFLAG-CMV-7.1-I215L质粒为模板,利用PCR方法扩增非洲猪瘟病毒I215L基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a,构建pET-28a-I215L重组质粒,并将其转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白.重组蛋白经His柱层析纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性.[结果]成功构建了重组质粒pET-28a-I215L,重组菌经IPTG诱导后能够可溶性表达重组蛋白,产物约28 kDa,与预测大小一致.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶7290000;Western blot结果显示抗体具有较好的特异性.[结论]成功表达纯化了ASFV的泛素结合酶并制备其多克隆抗体,为后期解析ASFV泛素结合酶的结构、功能及病毒相关致病机制提供了重要的生物材料.

关键词

非洲猪瘟病毒/泛素结合酶/原核表达/多克隆抗体

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基金项目

北京市自然科学基金(6202002)

北京市2020年高水平人才交叉培养"实培计划(PXM2020_014207_000009)

山东省重大科技创新工程项目(2020CXGC010801)

出版年

2021
北京农学院学报
北京农学院

北京农学院学报

影响因子：0.539
ISSN：1002-3186
被引量1
参考文献量4
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