摘要
[目的]探究百合原生质体分离纯化和培养条件,为百合原生质体融合、再生体系建立、转基因育种等研究奠定基础.[方法]以'白天堂'百合无菌苗叶片为材料,采用纤维素酶、果胶酶和离析酶组合分离原生质体,采取单因素试验法,对影响原生质体的制备及再生条件的主要因素即渗透压、酶解组合、细胞筛和酶解时间进行筛选与优化.[结果]以百合无菌苗叶片在1.0％纤维素酶+0.5％离析酶+0.1％果胶酶+0.6 mol/L甘露醇+10.0 mmol/L CaCl2·2H2O+20.0 mmol/L MES+20.0 mmol/L KC1 混合酶解液为最优条件,25℃,25 r/min,pH为5.6黑暗酶解6h;孔径75µm细胞筛过滤,600 r/min离心5 min收集细胞,原生质体产量可达6.4×105个/mL,原生质体活力为78.0％;将纯化后密度为1×105个/mL的原生质体溶液接种在葡萄糖作为唯一碳源的培养基中可以存活,并生长产生细胞壁,但没有启动细胞分裂和诱导形成愈伤组织.[结论]初步建立'白天堂'百合的高效原生质体分离与纯化体系,为对原生质体进一步操作研究奠定基础.
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