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腺病毒介导神经生长因子对遗传性视网膜变性RCS大鼠视细胞的营救

Adenovirus-mediated nerve growth factor rescues photoreceptor in RCS rats

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目的:探讨先天性视网膜变性病因以及对其进行基因治疗的可行性.方法:TUNEL法对RCS大鼠视细胞的丧失进行研究;构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒pAdE1CMV-NGF,经与 p JM17在293细胞中同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒AdE1CMV-NGF.琼脂糖覆盖法测定滴度.AdE1CMV-NGF和AdE1CMV-LacZ转导培养视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium , RPE)细胞.将AdE1CMV-LacZ转导组进行x-gal染色估计转导效率,取AdE1CMV-NGF转导组RPE细胞及其条件培养液,用RT-P C R和Western Blot进行表达检测,用条件培养液刺激PC12细胞,证实表达活性.直接进行RCS 大鼠视网膜下腔转导,一眼注射AdE1CMV- NGF,则另一眼注射AdE1CMV- LacZ,左右眼随机进行.光镜下观察视细胞存活情况.结果:TUNEL法显示25、35、45、55及6 5 d RCS大鼠视网膜视细胞层存在广泛凋亡; AdE1CMV-NGF的滴度可达5×1010 pfu/ml; 4.6×106 pfu/ml滴度AdE1CM V-LacZ可使RPE细胞发生100%转导; PC12细胞受AdE1CMV-NGF转导RPE细胞条件培养液刺激长出突触; AdE1CMV-NGF视网膜下腔注射使RCS鼠视细胞存活时间明显延长,达15 d以上. 结论: 视网膜变性模型RCS大鼠视细胞的丧失是以凋亡方式进行 ,腺病毒介导神经生长因子可延长其存活时间.

刘世全、张薇、贾东辉、郑姝颖、王申五、王薇、张惠蓉

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北京大学,人民医院中心实验室,北京,100044

北京友谊医院眼科

中国医学,科学院,肿瘤医院

北京大学,第三医院眼科

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神经生长因子/药理学 脱噬作用 基因疗法 视网膜变性 /治疗

北京市自然科学基金

7972018

2000

北京大学学报(医学版)
北京大学

北京大学学报(医学版)

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.681
ISSN：1671-167X
年,卷(期)：2000.32(5)
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