摘要
为实现人可溶性程序性死亡因子配体1(soluble programmed death ligand-1,sPD-L1)在原核表达系统的高效表达,根据GenBank发表的sPD-L1(GenBank登录号:AY254342.1)基因序列,在不改变sPD-L蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成PD-L1胞外域基因全长序列,克隆至质粒载体pET28a(+),转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)进行诱导表达,利用镍柱对目的蛋白进行纯化.纯化后的目的蛋白经SDS-PAGE电泳、蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附试验进行生物特性鉴定.结果表明:重组质粒经过Nco I、Xhol I双酶切鉴定显示在668 bp处有一条特异性条带,与预期相符;当诱导条件为0.5 mmol/L IPTG、37℃、9 h时,重组蛋白具有最高表达量.纯化产物经过Western blot鉴定,结果显示在28 KD左右有明显蛋白条带出现,而空白对照组则无条带.ELISA鉴定结果显示其可以与进口小鼠抗人PD-L1单克隆抗体发生较强的反应,说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达sPD-L1重组蛋白,可为后续开展sPD-L1检测方法的研究奠定基础.
基金项目
重庆市教委科学技术研究项目(KJZD-K201901101)
重庆理工大学研究生创新项目(ycx20192068)
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