重庆理工大学学报2022，Vol.36Issue(10) ：305-310.DOI:10.3969/j.issn.1674-8425(z).2022.10.037

犬瘟热病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and identification of monoclonal antibodies against Nucleocapsid Protein of Canine Distemper Virus

冉皑 凌洪权 曾政 骆璐 吴胜昔 董春霞 李云 陈娅
重庆理工大学学报2022，Vol.36Issue(10) ：305-310.DOI:10.3969/j.issn.1674-8425(z).2022.10.037
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犬瘟热病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and identification of monoclonal antibodies against Nucleocapsid Protein of Canine Distemper Virus

冉皑 1凌洪权 2曾政 2骆璐 2吴胜昔 1董春霞 2李云 1陈娅1
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作者信息

  • 1. 重庆理工大学 药学与生物工程学院, 重庆 400054
  • 2. 重庆市动物疫病预防控制中心, 重庆 401120
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摘要

为了制备犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,从而为建立CDV的诊断方法提供有效试剂.将纯化后的CDV核蛋白作为免疫原注射至BALB/c小鼠腹腔中,取经4次长程免疫和1次加强免疫并达到融合标准的小鼠脾脏刮制成悬液,与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合制备杂交瘤细胞,利用间接ELISA筛选,并对单抗进行生物特性鉴定.结果表明:经过筛选后共获得2株可持续分泌抗CDV NP的单克隆细胞株,以3-3 G、1-10 B命名.2株细胞株抗体经效价测定均可达到1:2048000;经亚型鉴定,2株杂交瘤细胞均为IgG2型;经过protein A柱纯化,抗体纯度达到了90％以上;BCA法测得抗体浓度至少达2.78 mg/mL;通过Western blot鉴定,制备所得CDV NP单克隆抗体与纯化的CDV NP抗原在预期的60 kd处有蛋白免疫印迹条带.该研究制备的单克隆抗体为后续犬瘟热的检测方法的研究奠定了基础.

关键词

犬瘟热病毒/核衣壳蛋白/单克隆抗体/细胞融合/效价测定

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基金项目

出版年

2022
重庆理工大学学报
重庆理工大学

重庆理工大学学报

CSTPCD北大核心
影响因子：0.567
ISSN：1674-8425
被引量1
参考文献量7
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