狂犬病病毒核衣壳蛋白的原核表达与鉴定

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中文摘要：为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RV N基因序列(登录号为1489853),在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)/RV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱进行重组RV N蛋白的纯化,对纯化后的RV N蛋白进行SDS-PAGE鉴定及Western blot分析.结果表明:重组质粒双酶切后在1359 bp处有目的条带,经测序后与其所对应的已知基因序列完全相符,当重组菌在IPTG浓度0.1mmol/L、30℃诱导6 h,RV N蛋白表达量最高;经过镍柱纯化获得了RV N重组蛋白;BCA法测得重组RV N蛋白浓度达1.783 mg/mL;在51 KD处可见明显的蛋白印迹,与预期目的条带相符;使用该方法成功在大肠杆菌系统高效表达了RV N蛋白,为后续狂犬病的检测与新型疫苗的研制奠定了基础.

外文标题：Prokaryotic expression and identification of rabies virus nucleocapsid protein

作者：

谷志鹏、向梦玲、凌洪权、骆璐、吴胜昔、董春霞、冉皑、郭宇

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作者单位：

重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054

重庆市动物疫病预防控制中心,重庆 401120

关键词：

狂犬病病毒 N蛋白原核表达镍柱纯化蛋白免疫印迹

基金：

重庆市技术创新与应用示范专项重庆市巴南区科技计划项目重庆理工大学研究生创新基金大学生创新创业训练计划项目大学生创新创业训练计划项目大学生创新创业训练计划项目重庆市生猪产业技术体系项目

项目编号：

cstc2018jscxmszdX00492020TJZ008lgycx 202021282021CX1462021CX1472021CX14820211105

出版年：

2023

DOI：

10.3969/j.issn.1674-8425(z).2023.02.038

重庆理工大学学报

重庆理工大学

重庆理工大学学报

CSTPCD北大核心

影响因子：0.567

ISSN：1674-8425

年,卷(期)：2023.37(4)

参考文献量14