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脱-γ-羧基凝血酶原蛋白的原核表达与鉴定

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为实现脱-γ-羧基凝血酶原(des-γ-carboxy-prothrombin,DCP)在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的DCP基因CDS序列(LX095963),在保证DCP蛋白氨基酸序列正确的基础上,优化该基因的密码子;化学合成CDS序列基因,并将其融合至pET28 a(+)质粒中,构建pET28a(+)/DCP重组质粒;将该质粒转化至感受态BL21(DE3)中进行诱导表达,利用Ni柱纯化DCP蛋白,进行DCP重组蛋白纯度检测、浓度测定及蛋白印迹分析.结果表明:重组质粒在1875 bp处的双酶切条带,经测序后与已优化的基因序列完全切合.重组菌的DCP蛋白表达最高时,诱导条件为25℃、IPTG终浓度为0.8 mmol/L、时间6 h;经Ni柱纯化后的DCP重组蛋白纯度较高,浓度达1.04 mg/mL;在72 kD处有明显的蛋白条带,切合预期.在大肠杆菌系统中成功表达出DCP蛋白,为后续DCP检测方法研究提供试剂参考.
Prokaryotic expression and identification of des-γ-carboxyprothrombin protein

龚吕鸿、徐丽、刘雅楠、吴胜昔、许东、秦萍、韦广苗、曾鹏

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重庆理工大学 药学与生物工程学院,重庆 400054

重庆市第七人民医院,重庆 400054

脱-γ-羧基凝血酶原 Ni柱纯化 原核表达 蛋白免疫印迹

重庆市教委科学技术研究项目重庆理工大学研究生创新基金大学生创新创业训练计划项目大学生创新创业训练计划项目

KJZD-K201901101gzlcx202220932022CX2042022CX205

2023

10.3969/j.issn.1674-8425(z).2023.05.039

重庆理工大学学报
重庆理工大学

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CSTPCD北大核心
影响因子：0.567
ISSN：1674-8425
年,卷(期)：2023.37(10)
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