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体外法研究壳聚糖对无乳链球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的保护作用

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本试验采用体外法研究壳聚糖(CTS)对无乳链球菌(S.agalactiae)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎性损伤的保护作用.首先,采用不同浓度(0、15.625、31.25、62.5、125、250、500和1 000 mg/mL)的CTS处理BMECs 12和24 h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测BMECs活性,根据BMECs活性筛选出CTS的适宜作用时间(24 h)和作用浓度(31.25、125和250 mg/mL),用于后续试验.然后,采用双因素试验设计,以不进行CTS处理和S.agalactiae诱导的BMECs作为对照组,以S.agalactiae诱导6h的BMECs作为S.agalactiae组,以不同浓度(31.25、125和250 mg/mL)CTS处理24 h的BMECs作为CTS组,以不同浓度(31.25、125和250 mg/mL) CTS处理24 h后再经S.agalactiae诱导6h的BMECs作为CTS(-)+sgc组,每组4个重复.使用荧光定量PCR的方法检测各组BMECs的白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、IL-8、Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和转化生长因子β活化激酶1(TAK1)的mRNA表达量,使用Western blot的方法检测各组BMECs的核因子-κB(NF-κB)抑制蛋白-α(IκB-α)、磷酸化NF-κB-p65(p-NF-κB-p65)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白表达量.结果 显示:1)31.25和125 mg/mL的CTS显著或极显著降低了BMECs的IL-6、IL-8、TLR2、MyD88、IRAK4和TRAF6 mRNA表达量(P＜0.05或P＜0.01);31.25、125和250 mg/mL的CTS极显著降低了S.agalactiae诱导的BMECs的IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-8、TLR2、MyD88、IRAK4、TRAF6和TAK1mRNA表达量(P＜0.01).2)31.25、125和250 mg/mL的CTS显著或极显著降低了BMECs和S.agalactiae诱导的BMECs的p-NF-κB-p65、p-p38、p-ERK1/2和p-JNK蛋白表达量(P＜0.05或P＜0.01).由上述结果可知,CTS可以通过抑制NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路转导来降低S.agalactiae诱导BMECs产生炎症反应,从而有效保护细胞,降低炎性损伤作用.
In Vitro Study on Protective Effect of Chitosan against Inflammation Injury of Bovine Mammary Epithelial Cells Induced by Streptococcus agalactiae

孙铭维、童津津、蒋林树、熊本海、毛胜勇

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北京农学院动物科学技术学院,奶牛营养学北京市重点实验室,北京102206

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193

南京农业大学动物科学技术学院,南京210014

壳聚糖 无乳链球菌 奶牛乳腺上皮细胞 炎性损伤 保护作用

“十三五”国家重大科技专项国家自然科学基金北京市博士后基金

2017YFD070160431802091

2020

动物营养学报
中国畜牧兽医学会

动物营养学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.297
ISSN：1006-267X
年,卷(期)：2020.32(3)
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