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核转录因子-κB/β-连环蛋白信号通路介导肠产毒性大肠杆菌引致IPEC?J2细胞损伤

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本试验旨在探讨肠产毒性大肠杆菌(ETEC)造成IPEC⁃J2细胞损伤的分子机制.ETEC K88感染、核转录因子-κB(NF⁃κB)抑制剂处理IPEC⁃J2细胞以及小干扰RNA(siRNA)沉默IPEC⁃J2细胞中β-连环蛋白(β⁃catenin)基因的表达后,采用定量PCR(qPCR)法检测细胞中NF⁃κB、闭锁小带蛋白-1(ZO⁃1)、闭锁蛋白(occludin)、Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、β-连环蛋白(β⁃catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和人髓细胞增生原癌基因(c⁃Myc)的mRNA表达量,用Western blotting法检测细胞中ZO⁃1、occludin的蛋白表达量和p65 NF⁃κB的磷酸化水平,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)、白细胞介素-8(IL⁃8)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果表明:ETEC K88作用细胞6或24 h时,ZO⁃1和occludin的蛋白表达量以及β⁃catenin和c⁃Myc的mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),TNF⁃α、IL⁃8含量和LDH活性显著上升(P<0.05),p65 NF⁃κB的磷酸化水平在ETEC K88作用细胞1、3和6 h时均极显著上升(P<0.01),TLR2、TLR4的mRNA表达量在ETEC K88作用细胞6和12 h时均极显著上升(P<0.01).NF⁃κB被抑制后,TNF⁃α、IL⁃8和LDH的活性均极显著降低(P<0.01),ZO⁃1和occludin的蛋白表达量以及NF⁃κB的mRNA表达量均极显著升高(P<0.01).siRNA沉默 β⁃catenin基因后,各时间点β⁃catenin、cyclin D1和c⁃Myc的mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),LDH的活性显著上升(P<0.05).综上所述,ETEC K88通过上调NF⁃κB信号通路引起炎症反应,下调β⁃catenin信号通路活化抑制IPEC⁃J2细胞的增殖,从而诱导IPEC⁃J2细胞损伤.
Nuclear Transcription Factor⁃κB/β⁃Catenin Signaling Pathway Mediates Enterotoxigenic Escherichia coli Causing IPEC⁃J2 Cell Injury

窦彩霞、李海花、孙泽阳、王倩、尚智援、乔家运

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天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室,天津 300387

天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津 300384

ETEC K88 IPEC⁃J2细胞 NF⁃κB信号通路 β⁃catenin信号通路

天津市自然科学基金天津市自然科学基金天津市"131"创新型人才团队天津市高校"学科领军人才培养计划"

18JCYBJC3000020180338

2020

10.3969/j.issn.1006?267x.2020.12.042

动物营养学报
中国畜牧兽医学会

动物营养学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.297
ISSN：1006-267X
年,卷(期)：2020.32(12)
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