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甘草酸通过c-Jun氨基末端蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的IPEC-J2细胞炎症反应

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本试验旨在研究甘草酸(GL)缓解脂多糖(LPS)诱导的IPEC-J2细胞炎症的分子机制.选择IPEC-J2细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测GL在不同浓度(0、10、50、100、200、500 μmol/L)下处理不同时间(12、24、48 h)后的细胞活力,从而确定合适的GL处理条件.试验共设4个组,分别为对照组[IPEC-J2细胞生长24 h后,经二甲基亚砜(DMSO)处理12 h再经杜氏磷酸缓冲液(DPBS)共同处理12 h]、LPS组(IPEC-J2细胞生长24 h后,经DMSO处理12 h再经10 μg/mL的LPS共同处理12 h)、GL组(IPEC-J2细胞生长24 h后,经50 μmol/L的GL处理12 h再经DPBS共同处理12 h)和GL+LPS组(IPEC-J2细胞生长24 h后,经50 μmol/L的GL处理12 h再经10 μg/mL的LPS共同处理12 h).采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测LPS和GL处理后细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及高迁移率族蛋白1(HMGB1)的水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中IL-lβ、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹(Western blotting)法和免疫荧光染色法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)信号通路相关蛋白的表达水平.结果显示:1)与未添加GL相比,浓度为50 μmol/L的GL处理24 h对IPEC-J2细胞活力无显著影响(P＞0.05),故后续选择浓度为50 μmol/L的GL处理24 h作为GL的适宜处理条件.2)与对照组相比,LPS组中IL-6的水平和mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);与LPS组相比,GL+LPS组中IL-6的水平和mRNA表达水平显著降低(P＜0.05).3)与对照组相比,LPS刺激显著增加了c-Jun氨基末端蛋白激酶1/3(p-JNK1/3)和c-Jun的蛋白表达水平(P＜0.05);与LPS组相比,GL预处理显著降低了p-JNK1/3和c-Jun的蛋白表达水平(P＜0.05),但对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、核因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达水平无显著影响(P＞0.05).4)LPS组细胞核中磷酸化c-Jun(p-c-Jun)荧光强度显著高于对照组(P＜0.05),且GL预处理可使细胞核中p-c-Jun荧光强度显著下降(P＜0.05).综上所述,GL可以通过下调IL-6基因表达以及c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)信号通路相关蛋白表达,缓解LPS引起的IPEC-J2细胞的炎症反应.
Glycyrrhizin Alleviates Lipopolysaccharide-Induced Inflammatory Response in IPEC-J2 Cells via c-Jun N-Terminal Protein Kinase Pathway

glycyrrhizinIPEC-J2 cellsJNK signaling pathwayanti-inflammatory function

赵潇晗、司玮、赵青余、张军民、赵金山、秦玉昌

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青岛农业大学动物科技学院,青岛266109

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193

甘草酸 IPEC-J2细胞 JNK信号通路 抗炎功能

国家重点研发计划国家重点研发计划中国农业科学院科技创新工程项目

2021YFD13003012021YFD1300303ASTIP-IAS-12

2023

10.12418/CJAN2023.430

动物营养学报
中国畜牧兽医学会

动物营养学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.297
ISSN：1006-267X
年,卷(期)：2023.35(7)
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