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基于转录组分析猪β-防御素114在巨噬细胞中的免疫调节作用及机制

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本试验旨在基于转录组研究猪β-防御素114(PBD114)在巨噬细胞中的免疫调节作用及机制.试验采用不同浓度(1~256 μg/mL)的PBD114处理猪肺泡巨噬细胞3D4/21,并分别在1、3、6和12 h收集细胞培养液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10).为更加深入揭示PBD114在巨噬细胞中的免疫调节作用及机制,本试验通过转录组分析0(MOCK组)和100 μg/mL PBD114(PBD114组)对培养12 h猪肺泡巨噬细胞3D4/21相关基因表达的影响,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证转录组测序结果.结果表明:1)适宜浓度PBD114能够显著促进猪肺泡巨噬细胞3D4/21分泌TNF-α和IL-10(P<0.05),并且存在剂量依赖和时间效应.2)转录组测序表明,MOCK组和PBD114组共鉴定出1 894个差异表达基因(DEGs).其中,与MOCK组相比,PBD114组CXC基序趋化因子配体2(CXCL2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、集落刺激因子3(CSF3)、白血病抑制因子(LIF)和白细胞介素-1α(IL-1α)等1 170个基因显著上调[差异倍数(FC)≥2,校正P值(ad-justed P-value)≤0.001],B 细胞淋巴瘤 6β(Bcl6β)、B 细胞淋巴瘤 3(Bcl3)、CD2、CD4 和 CD83等724个基因显著下调(FC≥2,adjusted P-value≤0.001).DEGs基因本体(GO)功能注释主要分布在分子功能、细胞组分和生物过程,DEGs数量分别是1 832、1 844和1 802个;京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路显著富集到95条(Q<0.05),其中肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、核因子-κB(NF-κB)信号通路、Toll样受体(TLR)信号通路和白细胞介素-17(IL-17)信号通路等信号通路参与免疫激活,DEGs数量分别是38、66、33、29和27个;蛋白质-蛋白质互作(PPI)和关键驱动分析(KDA)分析表明,RELB、TNF-α诱导蛋白3(TNFAIP3)和TNF受体相关因子1(TRAF1)等基因在PBD114调节巨噬细胞免疫中起着关键作用.3)qRT-PCR验证结果表明,8个随机选择的DEGs的表达趋势与转录组测序结果一致.由此可见,PBD114可以通过RELB、TNFAIP3和TRAF1等关键基因,以及TNF、MAPK、NF-κB、TLR和IL-17等信号通路激活巨噬细胞免疫.
Analysis of Immunomodulatory Effects and Mechanisms of Porcine β-Defensin 114 in Macrophages Based on Transcriptome

porcine β-defensin 114macrophageimmunityinflammation

李林峰、黄升、陈利、江山、黄金秀、杨飞云、王贵学、刘作华、苏国旗

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重庆市畜牧科学院,重庆402460

农业农村部养猪科学重点实验室,重庆402460

西南大学动物科学技术学院,重庆400715

重庆大学生物工程学院,重庆400044

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猪β-防御素114 巨噬细胞 免疫 炎症

重庆市科研机构绩效引导专项重庆市博士后基金特别资助项目重庆市英才计划"包干制"项目

cstc2021jxj1800012130921201

2023

动物营养学报
中国畜牧兽医学会

动物营养学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子:1.297
ISSN:1006-267X
年,卷(期):2023.35(8)
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