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苜蓿源miR168b通过靶向肉碱棕榈酰转移酶1A对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和脂滴积累的调控研究

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本试验旨在探究苜蓿源miRNAs(mtr-miRNAs)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖和凋亡的影响.试验首先通过CCK8、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、流式细胞术、基因和蛋白定量等方法检测苜蓿源-miR168b(mtr-miR168b)对BMECs增殖、凋亡和周期的影响.然后,敲低mtr-miR168b靶基因肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)表达后,检测了 BMECs的活力和凋亡.通过诱导转染后细胞,用氟硼二吡咯(Bodipy)染色和油红O染色检测mtr-miR168b和CPT1A基因干扰对BMECs脂滴合成的影响.结果表明:1)mtr-miR168b高表达极显著降低了BMECs 活力(P＜0.01).2)mtr-miR168b 高表达极显著抑制了 BMECs 增殖(P＜0.01),延长了细胞G1～S期进程,极显著促进了细胞凋亡(P＜0.01).3)mtr-miR168b在BMECs中高表达极显著抑制了细胞增殖基因周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白D2(Cvclin D2)的基因的表达水平(P＜0.01),极显著增加了凋亡标志基因Bc12关联X蛋白(BAX)基因的表达水平(P＜0.01),极显著抑制了 PCNA蛋白表达水平(P＜0.01),极显著增加了 BAX蛋白表达水平(P＜0.01),并且mtr-miR168b显著抑制了蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达水平(P＜0.05).4)mtr-miR168b高表达抑制了 BMECs中脂滴的积累.5)干扰mtr-miR168b的靶基因CPT1A,对BMECs脂滴积累也有抑制作用.综上所述,mtr-miR168b可通过抑制BMECs增殖,促进细胞凋亡,并通过靶向CPT1A基因抑制BMECs中脂滴的生成.试验结果可为mtr-miRNAs调控牛奶乳脂合成提供分子层面的技术支撑.
Alfalfa miR168b Regulates Proliferation,Apoptosis and Lipid Droplet Production in Bovine Mammary Epithelial Cells through Target Gene Carnitine Palmityl Transferase 1A

alfalfa-derived exogenous miR168bCPT1Abovine mammary epithelial cellsproliferationlip-id droplet

贾晶莹、刘宝宝、蔡小艳

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宁夏大学农学院,银川 750021

宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室,银川 750021

苜蓿源miR168b CPT1A 奶牛乳腺上皮细胞 增殖 脂滴

国家自然科学基金宁夏科技厅优秀青年项目

319606802022AAC05012

2023

10.12418/CJAN2023.611

动物营养学报
中国畜牧兽医学会

动物营养学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.297
ISSN：1006-267X
年,卷(期)：2023.35(10)
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