奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价

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中文摘要：乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用.为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化.通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法.结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型"茶托"形状,介于30～200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80％以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×1012个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05).结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础.

外文标题：Optimization and Evaluation of Extraction Methods of Milk Exosomes from Dairy Cows

外文关键词：

milk exosomesdifferential overspeed centrifugal methodacetic acidrennetextraction and identification

作者：

赵莹、王靖雷、王萌、王立斌、张倩、李志杰、马鑫、余四九、潘阳阳

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作者单位：

甘肃农业大学动物医学院,兰州 730070

甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心,兰州 730070

关键词：

乳源外泌体差速超速离心法乙酸凝乳酶提取鉴定

基金：

甘肃农业大学青年导师基金甘肃省重点人才项目国家自然科学基金地区科学基金甘肃省杰出青年基金

项目编号：

GAU-QDFC-2022-022022RCXM0163216085920JR10RA561

出版年：

2024

DOI：

10.12418/CJAN2024.113

动物营养学报

中国畜牧兽医学会

动物营养学报

CSTPCD北大核心

影响因子：1.297

ISSN：1006-267X

年,卷(期)：2024.36(2)

参考文献量22