摘要
目的 观察赖氨酸乙酰转移酶6A(lysine acetyltransferase 6A,KAT6A)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达并探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 收集2018年7月至2020年1月在武汉大学中南医院肝胆胰外科行肝切除术的HCC病人组织标本40份,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测KAT6A在40例HCC病人癌组织及癌旁组织、9株肝癌细胞系(SK-hep1、HepG2、Hep3B、Huh-7、HCCLM3、HCCLM6、MHCC-97H、MHCC-97L和PLC/PRF/5)和人正常肝细胞系(THLE-2)中的mRNA和蛋白表达差异,研究其表达高低与HCC病人临床病理参数之间的关联性.实验组为转染Si-KAT6A小干扰、oe-KAT6A质粒的肝癌细胞,对照组为转染了Si-NC小干扰oe-Vector质粒的肝癌细胞,48 h之后,采用CCK-8增殖实验、EdU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验和流式细胞术研究KAT6A敲低/过表达对M HCC-97H/Hep3B细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期的影响;采用单基因富集分析(GSEA)预测KAT6A涉及的下游信号通路并通过免疫印迹实验对其进行验证.结果 实时荧光定量PCR和Western blot结果提示,KAT6A在肝癌组织中的mRNA和蛋白表达水平较癌旁组织明显上调,且KAT6A在9株肝癌细胞系中的mRNA表达量明显高于人正常肝细胞系;KAT6A的表达水平与肝癌病人的肿瘤直径及是否合并门静脉癌栓显著相关;细胞功能实验结果表明,对KAT6A进行沉默后实验组M HCC-97H细胞相比于对照组其增殖、侵袭和迁移能力均明显下降,S期细胞比例显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);对KAT6A进行过表达后实验组Hep3B细胞相比于对照组其增殖、侵袭和迁移能力均明显提高,S期细胞比例显著增多,差异有统计学意义(P<0.05);GSEA和Western blot结果表明,KAT6A与Wnt/β-catenin信号通路密切相关,沉默KAT6A后,Wnt/β-catenin通路也受到显著抑制.结论 KAT6A在HCC组织和细胞中相比于癌旁组织和正常肝细胞,表达明显升高,且与病人的肿瘤直径、是否合并门静脉癌栓相关.通过调节Wnt/β-catenin通路,沉默KAT6A之后显著削减了肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力.
基金项目
武汉大学中南医院肿瘤研究与转化平台工程项目(ZLYNXM202004)
湖北省卫生健康委科研项目(WJ2019M209)
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