摘要
通过CRISPR/Cas9系统构建miR156家族中3个基因编辑载体(miR156A、miR156B和miR156C),为研究巨桉miR156家族基因的功能提供借鉴与参考.经聚合酶链式反应(PCR)扩增含靶基因的miR156A-gRNA、miR156B-gRNA和miR156C-gRNA,用BsaI酶切得到线性化的pHDE/Cas9载体后,经重组酶连接得到重组质粒.将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对重组质粒进行PCR鉴定与测序比对分析.结果表明,利用同源重组的方法构建了带有筛选标记基因mcherry的巨桉miR156家族CRISPR/Cas9载体系统,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100％.
基金项目
国家自然科学基金(31470677)
广东省自然科学基金(2015A030313560)
广东省自然科学基金(2017A030307017)
广东科技计划项目(2017A030303087)
广东高校果蔬加工与贮藏工程技术开发中心项目(2012gczxB001)
广东省攀登计划项目(pdjhb0343)
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