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山乌桕叶片DNA提取及ISSR-PCR反应体系优化

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为研究南方优良乡土彩叶树种山乌桕的遗传多样性,并为山乌桕种质培育研究提供技术参考.以山乌桕叶片为试验材料,对山乌桕ISSR-PCR反应体系进行优化,比较试剂盒法、改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和十二烷基硫酸钠(SDS)法对山乌桕叶片DNA的提取效果,并利用单因素试验和L25(53)正交试验对DNA模板用量、引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、退火温度和循环次数进行优化.结果表明,试剂盒法和改良CTAB法均可获得较高浓度和质量的DNA,都是提取山乌桕叶片DNA的良好方法;山乌桕叶片ISSR-PCR反应体系中,DNA模板用量对扩增效果影响最大,2×Taq Master Mix添加量的影响最小;山乌桕叶片ISSR-PCR的最优反应体系为:总体积20μL,其中含20 ng DNA模板1.5μL、2×Taq Master Mix 8.0μL、引物浓度0.8μmol·L-1.山乌桕叶片ISSR-PCR的反应程序为:94℃预变性5 min、94℃变性30 s、51.9℃退火45 s、72℃延伸90 s、40个循环,72℃延伸10 min、4℃保存.
Optimization of DNA extraction method and ISSR-PCR reaction system for Sapium discolor leaves

黄旭萍、黄一航、黄敏、王建超、陈孝丑、陈发兴

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福建农林大学园艺学院,福建 福州350002

福建省农业科学院果树研究所,福建 福州350013

福州植物园,福建 福州350012

山乌桕 DNA提取 简单重复序列区间-聚合酶链式扩增反应 体系优化

福建省林业科技项目

闽林科便函〔2020〕9号

2021

10.13324/j.cnki.jfcf.2021.02.007

森林与环境学报
福建农林大学

森林与环境学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.964
ISSN：2096-0018
年,卷(期)：2021.41(2)
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