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烟草花叶病毒P54基因的原核表达与蛋白纯化

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[目的] 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)编码的与复制相关通读P183基因中,编码一个P54基因,其功能及其作用分子机制还鲜见报道.为获得P54蛋白纯化样品开展本研究,以期为P54蛋白的功能及其作用分子机制研究奠定基础.[方法] 采用RT-PCR技术,从感染TMV的三生烟(Nicotiana tabacum var. Samsun NN)cDNA中扩增获得片段大小为1425 bp的烟草花叶病毒P54基因,并克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1,转化E coli BL21(DE3)中进行诱导表达,包涵体透析复性后采用Ni-NTA柱层析纯化,Western-blotting进行鉴定.[结果] 原核表达的TMV P54蛋白,主要以包涵体的形式存在;复性后经Ni-NTA柱层析纯化,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为60 kDa的单一条带.Western-blotting结果证实纯化蛋白为P54重组蛋白.[结论] 本研究纯化得到了重组P54蛋白,为进一步深入研究P54蛋白的功能奠定基础.
Prokaryotic Expression and Purification of Tobacco Mosaic Virus Specific P54 Protein

李聪、田培洁、张宇、张德咏、刘勇、张松柏

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湖南大学研究生院隆平分院,湖南 长沙 410125

湖南农业大学植物保护学院,湖南 长沙 410120

湖南省农业科学院植物保护研究所,湖南 长沙 410125

烟草花叶病毒 P54基因 原核表达 蛋白纯化

国家自然科学基金国家大宗蔬菜产业体系项目

31701765CARS-23-D-02

2021

10.19303/j.issn.1008-0384.2021.02.011

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2021.36(2)
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