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兔源F型多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立

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[目的]建立检测兔源F型多杀性巴氏杆菌的双重PCR检测方法,为兔巴氏杆菌病的诊断提供技术支持.[方法]根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因和F型多杀性巴氏杆菌fcbD基因的保守序列分别设计了2对引物进行双重PCR扩增,对双重PCR检测方法的退火温度和混合引物浓度进行优化,并对方法的特异性、敏感性、重复性和准确性进行验证.[结果]该双重PCR方法最优反应条件为:退火温度60℃、混合引物浓度0.8μmol·L-1.该双重PCR方法能扩增出兔源F型多杀性巴氏杆菌的kmt1基因片段(260 bp)和fcbD基因片段(490 bp)、兔源A和D型多杀性巴氏杆菌的kmt1基因片段(260 bp),对兔源支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和阴性对照均为阴性,无交叉反应,特异性较强.该方法对兔源F型多杀性巴氏杆菌的最低检出限为1×103拷贝·μL-1,敏感性高.应用该方法对90份病死兔肺脏样品进行批内和批间重复性试验,结果均一致,重复性好.应用该双重PCR方法和已报道的多重PCR方法同时检测87份已知结果的呼吸道病死兔肺脏样品,结果显示双重PCR方法检测结果和已报道的多重PCR方法检测结果与已知结果的符合率分别为97.70％和94.25％,双重PCR方法检测结果与已报道的多重PCR方法检测结果的符合率为93.10％,双重PCR方法的准确性更高.[结论]针对多杀性巴氏杆菌kmt1基因和F型多杀性巴氏杆菌fcbD基因建立的双重PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和准确性,为兔源F型多杀性巴氏杆菌的快速检测提供了技术支撑.
Duplex PCR Detection on Pasteurella multocida Serogroup F Strain in Rabbits

王锦祥、孙世坤、陈岩峰、陈冬金、桑雷、谢喜平

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福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013

兔 F型多杀性巴氏杆菌 kmt1基因 fcbD基因 双重PCR检测方法

国家现代农业产业技术体系建设专项福建省自然科学基金福建省科技计划公益类专项

CARS-43-G-52002J013462020R10260015

2021

10.19303/j.issn.1008-0384.2021.05.001

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2021.36(5)
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