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山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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[目的]建立一种快速、敏感的ENTV-2检测方法,用于ENT的早期诊断与流行病学调查.[方法]通过生物信息学的方法将ENTV-2与ENTV-1、ERVs、JSRV进行比对,寻找ENTV-2的保守序列并设计1对特异性引物,建立SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,对所建立的PCR反应条件进行优化,将PCR扩增产物连接T载体构建的阳性质粒作为标准品,对SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性进行验证.[结果]建立的检测ENTV-2 qPCR方法标准曲线呈现良好的线性关系(R2=0.992);该方法的特异性良好,对ENTV-2可以产生特异性扩增曲线,与ENTV-2高度同源的ERVs没有交叉反应,也无法扩增羊口疮病毒(ORFV)、绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)等常见病原;敏感性良好,最低检测限度为7.5×102 copies·μL−1,敏感性可达常规PCR检测方法的100倍;批内、批间的变异系数CV<1％,重复性良好;对81份临床样品的阳性检出率为17.3％.[结论]建立的SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR方法特异性良好,敏感性较高,重复性良好,为山羊地方性鼻内肿瘤的早期、快速检测提供了技术支持.
A SYBR-Green Ⅰ RT-qPCR Assay for Detecting Enzootic Nasal Tumor Virus in Goats

张靖鹏、江锦秀、林裕胜、游伟、刘道泉、毛坤明、江斌、胡奇林

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福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013

福州市动物疫病预防控制中心,福建 福州 350002

福建省福清市畜牧兽医技术服务中心,福建 福清 350300

山羊地方性鼻内肿瘤病毒 SYBR-Green Ⅰ 荧光定量PCR

福建省科技重大专项福建省科技计划公益类专项

2019NZ090072018R1023-1

2021

10.19303/j.issn.1008-0384.2021.07.007

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2021.36(7)
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