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抗利巴韦林单链抗体基因构建及其结构分析

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[目的]克隆构建利巴韦林(RBV)单链抗体(scFv)基因,对其理化特性进行分析并对蛋白质结构进行模拟,为后期检测方法的建立及分子改造提供参考依据.[方法]以分泌利巴韦林抗体的杂交瘤细胞株总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),然后以柔性连接短肽(Gly4Ser)3为接头拼接完整的scFv-RBV.利用生物信息学方法对scFv-RBV的理化性质及蛋白结构功能进行预测分析.[结果]构建的scFv基因编码240个氨基酸,相对分子质量为26162.27 Da,理论等电点(pI)为8.57.在二级结构中,β-折叠(39.17％)和无规卷曲(45.41％)占主导地位,α-螺旋(5.42％)和β-转角(10％)相对较少.在三级结构中,VH和VL区域被Linker相互牵拉靠近,形成典型的口袋样形状的空间构象,符合单链抗体的结构特征,理论上可以与RBV抗原特异性结合.[结论]成功构建scFv-RBV基因,并利用生物信息学方法预测分析scFv的二级、三级结构,该结果可为后期进行单链抗体的表达、纯化及定向进化提供理论支撑.
Construction and Structure of Anti-ribavirin Single-chain Antibody Gene

路少鹏、岳敏、张欣欣、李丹、王文魁、齐永华

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山西农业大学动物医学学院,山西 太谷 030801

新乡学院动物疫病分子诊断河南省工程实验室,河南 新乡 453000

利巴韦林(RBV) 单链抗体(scFv) 生物信息学 结构预测

国家重点研发计划

2018YFC1602900

2021

10.19303/j.issn.1008-0384.2021.08.006

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2021.36(8)
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