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辣椒脉黄病毒P4蛋白多克隆抗体制备与应用

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[目的]辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)属马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus),生产上主要侵染辣椒,目前在我国呈现快速扩展态势,因此,亟需开展PeVYV致病性研究,为分析对辣椒的潜在威胁提供依据.以PeVYV编码运动蛋白P4为免疫源,制备多克隆抗体,建立PeVYV P4蛋白特异性检测方法,为PeVYV P4蛋白功能研究奠定基础.[方法]采用RT-PCR技术,从感染PeVYV辣椒cDNA中扩增获得片段大小为471 bp的PeVYV P4基因,并克隆到原核表达载体pDEST17,转化E.coli Rosetta中进行诱导表达,采用Ni-NTA柱层析纯化.以纯化P4蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.制备的多克隆抗体采用Western blotting检测.[结果]原核表达的PeVYV P4蛋白,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为25 kDa的单一条带.Western blotting检测表明,制备的多克隆抗体,特异性的结合P4蛋白.PeVYV侵染辣椒样本检测表明,制备的P4多克隆抗体能特异性检测PeVYV.[结论]制备的PeVYV P4多克隆抗体,可用于特异性检测PeVYV P4蛋白,为进一步深入研究P4蛋白的功能奠定基础.
Preparation and Application of Polyclonal Antibody against Vein Yellows Virus P4 on Chili Pepper Plants

卜姗、罗香文、张德咏、张松柏、张宇、刘勇

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湖南大学研究生院隆平分院,湖南 长沙 410125

湖南省农业科学院植物保护研究所,湖南 长沙 410125

辣椒脉黄病毒 P4基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设专项湖南省农业科学院创新项目

31772133CARS-23-D-022021CX89

2022

10.19303/j.issn.1008-0384.2022.01.010

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2022.37(1)
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