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转As6G-FFT基因烟草的阳性鉴定及基因拷贝数测定

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[目的] 为验证转As6G-FFT烟草的基因功能,筛选稳定遗传的阳性株系材料,以建立基于SYBR Green的实时荧光定量PCR的转基因拷贝数检测方法.[方法] 利用PCR检测、实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术及生理指标分析鉴定转As6G-FFT基因阳性烟草植株,并利用基于SYBR Green的实时荧光定量PCR鉴定阳性转基因烟草中As6G-FFT基因的拷贝数.[结果] (1)基于PCR检测,14个转基因烟草叶片均能扩增出目的片段,表明14个株系中均已成功转入目的基因As6G-FFT;(2)14个转基因株系中As6G-FFT基因表达量呈极显著(P<0.01)或极其显著上升(P <0.001),其中6个株系的表达量呈极其显著升高(P <0.001);且其表达量与野生型相比最高提高215.13倍;(3)基于生理指标,测定转As6G-FFT基因烟草的果聚糖含量,发现14个转基因株系中果聚糖含量呈极显著(P <0.01)或极其显著上升(P <0.001),其中13个株系的果聚糖含量极其显著升高(P <0.001);且其果聚糖含量与野生型相比最高提高10.47倍;(4)基于SYBR Green实时荧光定量PCR构建As6G-FFT和NtACT基因的标准曲线,分别为y=?0.2907x+3.0145和y=?0.2813x+8.0141,R2均为1;在检测的14个转基因株系中As6G-FFT基因拷贝数为1～3,其中1、2和3拷贝的单株数分别占总数的35.7％、50.0％和14.3％.[结论] 本研究从DNA、RNA和生理水平综合进行阳性转基因烟草的鉴定,鉴定结果更为准确.此外,还建立了基于SYBR Green实时荧光定量PCR的转基因烟草中外源As6G-FFT基因拷贝数检测方法,可用于快速、高效地估算转基因烟草中外源基因拷贝数,为后续获得稳定遗传材料提供筛选依据.
Identification and Copy Number of As6G-FFT in Transgenic Tobacco Plant

铁原毓、文军琴、田洁

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青海大学农林科学院/青海省蔬菜遗传与生理重点实验室,青海 西宁 810016

省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室,青海 西宁 810016

As6G-FFT基因 转基因烟草 阳性鉴定 拷贝数

国家自然科学基金青海省科技厅重点实验室项目中国科学院"西部之光"项目(2019年)

319605902020-ZJ-Y02

2022

10.19303/j.issn.1008-0384.2022.005.006

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2022.37(5)
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