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鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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[目的]旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白(BMPs)mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法.[方法]根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增,产物回收后克隆至pMD-18-T载体,构建阳性重组质粒作为标准品,优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件,建立其标准曲线,对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验.[结果]建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线为单峰,相关系数R2均大于0.998,组间和组内变异系数均小于1％.应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平,结果显示,BMP1、BMP2、BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高,分别为5.5×104、1.1×105、5.1×105和7.7×105拷贝·μL−1;BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高,分别为7.5×104和7.6×103拷贝·μL−1;而BMP3、BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高,分别为1.5×105、2.1×104、1.8×103和3.3×103拷贝·μL−1.[结论]本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段.
A SYBR Green I-based qRT-PCR Assay for Detecting Duck BMPs

刘鸿威、林昶、王劭、肖世峰、程晓霞、郑敏、陈少莺、曾显成、陈仕龙

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福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福建 福州 350002

福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013

福建省农业科学院莆田分院,福建 莆田 351100

鸭 骨形态发生蛋白(BMPs) 荧光定量PCR SYBR Green I

CXTD2021034XTCXGC2021018XTCXGC20210122022L3019

2022

10.19303/j.issn.1008-0384.2022.012.001

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2022.37(12)
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