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马缨杜鹃查尔酮异构酶(RdCHI1)重组蛋白的制备及功能验证

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[目的]制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础.[方法]根据所获得的马缨杜鹃查尔酮异构酶RdCHI1基因的序列信息设计引物,构建其原核表达载体,优化RdCHI1可溶性重组蛋白最佳诱导表达条件,制备可溶性重组蛋白并检测其活性.[结果]成功构建RdCHI1原核表达载体,RdCHI1重组蛋白可在上清中表达,最佳诱导条件为:15℃、36 h,IPTG浓度 0.35 mmol·L−1.经镍柱纯化得到质量较好的 RdCHI1重组蛋白,通过体外酶活反应确定,与对照组相比,RdCHI1可以更快地催化柚皮素查尔酮(Naringenin chalcone)反应生成柚皮素(Naringenin).[结论]RdCHI1为I型CHI,可极大提高柚皮素查尔酮生成柚皮素的速率,增加黄酮类物质积累量.
Preparation and Function Verification of Recombinant Protein of Chalcone Isomerase Gene from Rhododendron Delavayi

Rhododendron delavayichalcone isomeraseprokaryotic expression vectorsoluble recombinant proteinenzyme assay

王聿晗、孙世宇、鞠志刚、孙威、徐小蓉

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贵州师范大学生命科学学院/植物生理与发育调控重点实验室,贵州 贵阳 550025

贵州中医药大学药学院,贵州 贵阳 550025

西南喀斯特山地生物多样性保护重点实验室,贵州 贵阳 550025

马缨杜鹃 查尔酮异构酶 原核表达载体 可溶性重组蛋白 酶活测定

国家自然科学基金贵州省教育厅特色领域项目贵州省自然科学基金贵州省科技支撑计划贵州省高等学校高山杜鹃病虫害绿色防控重点实验室项目

31760076黔教合KY字[2021]059ZK[2023]270黔科合支撑[2020]4Y028号黔教技[2022]044号

2023

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2023.38(5)
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