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猪c-Myc蛋白多克隆抗体的制备

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[目的]克隆猪c-Myc基因CDS序列并构建其原核表达载体,同时纯化c-Myc蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,为进一步研究猪圆环病毒 2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep蛋白与宿主c-Myc蛋白之间的交互作用奠定基础.[方法]根据猪c-Myc全基因序列(GenBank No.NM_001005154)设计引物,以反转录PCR方法扩增c-Myc基因CDS序列,经Nde I/Xho I双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+);转化至Arctic-ExpressTM大肠杆菌后诱导表达;表达产物经变性、复性和His-Band Ni+层析柱亲和纯化后免疫新西兰白兔.抗原亲和层析法纯化抗体后,用间接ELISA法测定其效价,用Western blot检测其特异性.[结果]经检测,克隆产生的猪c-Myc基因CDS序列长度为 1359 bp,c-Myc-His重组蛋白主要以包涵体形式出现,分子质量约为 63 kDa,由此蛋白制备的多抗效价可以达到 1∶1093500,并能特异性识别猪c-Myc蛋白和重组蛋白c-Myc-His.[结论]本研究成功制备了猪c-Myc蛋白多克隆抗体,为研究猪c-Myc蛋白功能和其与PCV2 Rep蛋白之间的相互作用奠定了良好基础.
Preparation of Polyclonal Antibody Against c-Myc Protein in Sus scrofa

Porcine c-Myc proteinprokaryotic expression and purificationpolyclonal antibody

田淑婧、陈羽彤、陆春秀、苏春宇、吕其壮

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玉林师范学院生物与制药学院,广西 玉林 537000

广西农产资源化学与生物技术重点实验室,广西 玉林 537000

猪c-Myc蛋白 原核表达与纯化 多克隆抗体

国家自然科学基金玉林师范学院大学生创新创业训练计划

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2023

10.19303/j.issn.1008-0384.2023.08.002

福建农业学报
福建省农业科学院

福建农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.656
ISSN：1008-0384
年,卷(期)：2023.38(8)
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