目的 探讨长链非编码RNA癌症易感基因19(lncRNA CASC19)通过miR-152-3p/高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对骨肉瘤发生发展的影响.方法 实验设置si-NC组、si-CASC19组、pcDNA-NC组、pcDNA-CASC19组、miR-NC组、miR-152-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-152-3p组、si-CASC19+anti-miR-NC组、si-CASC19+anti-miR-152-3p组、si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-NC组、si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-HMGA2组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA CASC19、miR-152-3p、HMGA2 mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测HMGA2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证CASC19和miR-152-3p以及miR-152-3p和HMGA2的靶向关系.结果 骨肉瘤细胞Saos2、U2OS、HOS中lncRNA CASC19高表达,miR-152-3p低表达,HMGA2高表达(P<0.05).相较于si-NC组,si-CASC19组骨肉瘤细胞Saos2中lncRNA CASC19表达水平降低,HMGA2表达水平降低,CyclinD1表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高差异均有统计学意义(P<0.05).相较于miR-NC组,miR-152-3p组骨肉瘤细胞Saos2中miR-152-3p表达水平升高,HMGA2表达水平降低,CyclinD1表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高差异均有统计学意义(P<0.05).通过Starbase软件预测显示CASC19可直接靶向结合miR-152-3p,miR-152-3p可直接靶向结合HMGA2.双荧光素酶报告基因验证结果显示,共转染miR-152-3p和野生型CASC19和HMGA2的载体时,荧光素酶活性显著下降(P<0.05),而共转染miR-152-3p和靶向突变的CASC19和HMGA2的载体时,miR-152-3p对荧光素酶活性的抑制作用丧失.抑制CASC19表达后miR-152-3p表达水平升高(P<0.05),过表达CASC19后miR-152-3p表达水平下降(P<0.05);过表达miR-152-3p,HMGA2表达水平下降(P<0.05),抑制miR-152-3p表达,HMGA2表达水平升高(P<0.05).相较于si-CASC19+anti-miR-NC组,si-CASC19+anti-miR-152-3p组Saos2细胞中miR-152-3p表达水平降低,CyclinD1表达水平升高,Cleaved-caspase-3表达水平降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低差异均有统计学意义(P<0.05).与si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-NC组相比,si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-HMGA2组HMGA2表达水平降低,CyclinD1表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 抑制lncRNA CASC19通过上调miR-152-3p进而下调HMGA2的表达抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.
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