miR-135 b-5 p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的影响及机制研究

Experimental study of the effects of miR-135b-5p on IL-1β-induced chondrocyte injury and its action mechanism

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中文摘要：目的探讨微小RNA-135b-5p(miR-135b-5p)是否通过靶向血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)影响白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤.方法使用IL-1β诱导SD大鼠膝关节软骨细胞损伤.使用10 ng/ml IL-1β处理软骨细胞48 h,论为IL-1β组,同时以未经任何处理的软骨细胞设为对照(Con组).在软骨细胞中转染miR-135b-5p并使用IL-1β损伤软骨细胞.实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-135b-5p和ANGPTL2 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测ANGPTL2、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)抗体、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,Targetscan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-135b-5p与ANGPTL2的靶向关系.共转染miR-135b-5p和pcDNA-ANGPTL2,并使用IL-1β损伤软骨细胞,观察ANGPTL2过表达对miR-135b-5p过表达诱导的IL-1β损伤软骨细胞凋亡、炎症的影响.结果与Con组比较,IL-1β诱导的软骨细胞中miR-135b-5p表达量、Bcl-2蛋白表达量明显减少(P<0.05),ANGPTL2 mRNA、ANGPTL2蛋白表达量、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05).miR-135b-5p过表达明显降低IL-1β诱导软骨细胞ANGPTL2蛋白表达量、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平、凋亡率、Bax蛋白表达量(P<0.05),显著提高Bcl-2蛋白水平(P<0.05).miR-135b-5p靶向调控ANGPTL2的表达.ANGPTL2过表达逆转了miR-135b-5p过表达抑制IL-1β损伤的软骨细胞凋亡、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平、Bax蛋白表达的作用,和促进Bcl-2蛋白表达的作用.结论 miR-135b-5p通过靶向调控ANGPTL2表达保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤.

作者：

赵晓东、王磊

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作者单位：

277100 山东省枣庄市,枣庄矿业集团枣庄医院外六科

关键词：

miR-135b-5p ANGPTL2 IL-1β 软骨细胞凋亡炎症

出版年：

2021

DOI：

10.3969/j.issn.1002-7386.2021.08.003

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