目的 探讨长链非编码RNA MFI2-AS1(LncRNA)MFI2-AS1靶向调控微小RNA-331-3p(miR-331-3p)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的影响及其分子机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞H9c2,使用10μg/ml的LPS处理H9c2细胞24 h建立心肌细胞损伤模型.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MFI2-AS1与miR-331-3p的表达水平.利用脂质体转染法分别将si-NC、si-MFI2-AS1、miR-NC、miR-331-3p mimics、si-MFI2-AS1与anti-miR-NC、si-MFI2-AS1与anti-miR-331-3p转染至H9c2细胞,使用LPS处理24 h.甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证MFI2-AS1与miR-331-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、细胞周期蛋白1(CyclinD1)蛋白表达量.结果 LPS处理后,细胞中MFI2-AS1的表达水平升高(P<0.05),miR-331-3p的表达水平降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05);转染si-MFI2-AS1或miR-331-3p mimics后,细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05),CyclinD1蛋白水平升高(P<0.05);miR-331-3p过表达可抑制野生型质粒WT-MFI2-AS1转染细胞的荧光素酶活性(P<0.05);si-MFI2-AS1与anti-miR-331-3p共转染入H9c2细胞,细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05).结论 LncRNA MFI2-AS1通过靶向负调控miR-331-3p表达加重LPS诱导的心肌细胞损伤.
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