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新型冠状病毒E基因真核表达载体的构建及表达

Clone and Construction Eukaryotic Expression Vector of SARS-Cov-2 E Gene

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囊膜蛋白(E蛋白)是新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2,SARS-CoV-2)的小包膜蛋白,在调控冠状病毒复制方面有重要作用.为了更有利地研究SARS-CoV-2 E蛋白的生物学功能,研究成功构建了SARS-CoV-2 E基因的真核表达载体.首先,通过PCR技术扩增SARS-CoV-2 E基因,并将pCMV-Myc载体进行双酶切.随后,利用同源重组将SARS-CoV-2 E基因连接至pCMV-Myc载体.经酶切和测序鉴定发现,SARS-CoV-2 E基因成功克隆至pCMV-Myc载体中,并将重组质粒命名为pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E.将重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E转染至HEK-293T细胞,利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测重组质粒的表达以及定位情况.结果表明,重组质粒pCMV-Myc-SARS-CoV-2-E在HEK-293T细胞中成功表达,并且发现重组蛋白主要分布于胞质,少量存在于胞核,为进一步研究SARS-CoV-2 E蛋白的功能奠定基础.

于雯、郑亮、王宏宇、高鑫誉、吴志军、曹宏伟、张华

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黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,大庆 163319

黑龙江八一农垦大学生物技术中心

黑龙江八一农垦大学动物科技学院

新型冠状病毒 E基因 真核载体构建 蛋白表达

黑龙江八一农垦大学青年创新人才项目

CXRC2016-12

2022

10.3969/j.issn.1002-2090.2022.05.014

黑龙江八一农垦大学学报
黑龙江八一农垦大学

黑龙江八一农垦大学学报

影响因子：0.888
ISSN：1002-2090
年,卷(期)：2022.34(5)
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